| 伪狂犬病毒感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激和未折叠蛋白反应的影响 |
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| 引用本文： | 陈丽,倪敏舒,徐悦,鲍熹,庄腾寒,冯磊,郭美锦.伪狂犬病毒感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激和未折叠蛋白反应的影响[J].中国畜牧兽医,2022,49(8):3235-3244. |
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| 作者姓名： | 陈丽 倪敏舒 徐悦 鲍熹 庄腾寒 冯磊 郭美锦 |
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| 作者单位： | 1. 华东理工大学生物反应器工程国家重点实验室, 上海 200237;2. 江苏省农业科学院动物免疫工程研究所, 南京 210014;3. 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心, 扬州 225009;4. 江苏大学药学院, 镇江 212013;5. 江苏省食品质量安全重点实验室——省部共建国家重点实验室培育基地, 南京 210014 |
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| 基金项目： | 江苏省重点研发计划(BE2020407) |
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| 摘 要： | 【目的】探讨伪狂犬病毒(PRV)感染对BHK-21悬浮细胞内质网应激及未折叠蛋白反应(UPR)的影响。【方法】将悬浮的乳仓鼠肾细胞(BHK-21)以感染复数(MOI)0.01接种PRV,分别在接毒后12、24、36、48和56 h取样,用CCK-8法检测细胞存活率,按Reed-Muench法检测病毒滴度,筛选病毒接种处理的合适时间;以不接毒细胞作对照组,分别在感染后12、24、36和48 h取样,用实时荧光定量PCR法检测内质网应激标志分子葡萄糖调节蛋白78(GRP78)及UPR的3种感受蛋白(PERK、IRE1、ATF6)相关通路中基因的表达变化,Western blotting法检测相关蛋白的表达变化。在接种PRV同时分别加入0、0.001、0.005、0.01和0.02 μmol/L内质网应激诱导剂毒胡萝卜素(Tg)和0、20、40、80和160 μmol/L内质网应激抑制剂牛磺熊去氧胆酸(TUDCA),48 h收集细胞测定病毒滴度和细胞存活率。【结果】PRV感染56 h细胞存活率低于70%,感染48 h时病毒滴度达到最高(8.1 lg TCID50/mL),因此后续试验分别在接毒后12、24、36和48 h取样。与对照组相比,PRV感染36和48 h GRP78转录水平均极显著升高(P＜0.01);PERK通路中,转录激活因子4(ATF4)转录水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P＜0.01),生长抑制DNA损伤基因34(GADD34)转录水平在PRV感染36 h显著升高(P＜0.05)、48 h极显著升高(P＜0.01),磷酸化真核翻译起始因子(P-eIF2α)蛋白水平在PRV感染36、48 h均极显著升高(P＜0.01);IRE1通路中,PRV感染组细胞36 h后多以剪切形式sXBP1存在,同时下游p58IPKmRNA水平在36 h显著增加(P＜0.05),p58IPK和EDEM mRNA水平在48 h均极显著增加(P＜0.01);ATF6通路中,PRV感染不同时间ERp57、PDI、Calnexin和Calreticulin的表达均无显著变化(P＞0.05)。与0 μmol/L组相比,0.01和0.02 μmol/L Tg极显著降低细胞存活率(P＜0.01),0.005和0.01 μmol/L Tg均极显著增加了PRV病毒滴度(P＜0.01)。【结论】PRV感染可以诱导BHK-21悬浮细胞内质网应激,激活UPR的PERK和IRE1信号通路,说明PRV利用内质网应激增强其复制。
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| 关 键 词： | 伪狂犬病毒 BHK-21悬浮细胞 内质网应激 未折叠蛋白反应 |
| 收稿时间： | 2022-01-20 |
Effect of PRV Infection on the Endoplasmic Reticulum Stress and Unfolded Protein Response in Suspension-cultured BHK-21 Cells |
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| CHEN Li,NI Minshu,XU Yue,BAO Xi,ZHUANG Tenghan,FENG Lei,GUO Meijin.Effect of PRV Infection on the Endoplasmic Reticulum Stress and Unfolded Protein Response in Suspension-cultured BHK-21 Cells[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2022,49(8):3235-3244. |
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| Authors: | CHEN Li NI Minshu XU Yue BAO Xi ZHUANG Tenghan FENG Lei GUO Meijin |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Pseudorabies virus BHK-21 suspension-cultured cells endoplasmic reticulum stress unfolded protein response |
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