| 山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 高纪振,周丽梅,王爱华.山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法的建立[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2009,37(8):25-30. |
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| 作者姓名： | 高纪振 周丽梅 王爱华 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学,动物医学院,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放性实验室,陕西,杨凌,712100 |
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| 基金项目： | 西北农林科技大学青年骨干教师支持计划项目 |
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| 摘 要： | 【目的】制备抗CD58单克隆抗体,在此基础上建立可用于定量检测山羊血清中CD58含量的间接竞争ELISA方法。【方法】以纯化的CD58蛋白为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞融合技术制备抗CD58单抗,并对其特异性进行鉴定;在此基础上,建立CD58间接竞争ELISA检测方法,对不同生理时期山羊血清中CD58的含量进行检测。【结果】筛选出1株稳定分泌抗CD58单克隆抗体的杂交瘤细胞株G6;玫瑰花环抑制试验和Western-blotting试验表明,制备的细胞株能分泌针对CD58的特异性单克隆抗体;对间接竞争ELISA方法的反应条件进行优化后,建立了检测CD58的间接竞争ELISA方法,该方法最适可测范围为10~1000000 ng/mL,理论最低检测限为3.087 ng/mL,批内和批间平均变异系数分别为3.50%和5.22%;用建立的方法检测未发情和发情山羊血清中CD58含量分别为(32.160±3.69)和(35.929±3.08)μg/mL,怀孕山羊血清中CD58含量为(61.564±5.10)μg/mL。【结论】建立了山羊血清中CD58间接竞争ELISA检测方法,该方法敏感、特异,具有良好的重复性;对不同生理时期山羊血清中CD58含量的检测表明,怀孕山羊血清中CD58含量显著高于未发情和发情山羊。
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| 关 键 词： | CD58蛋白 单克隆抗体 间接竞争ELISA方法 |
| 收稿时间： | 2008/12/9 0:00:00 |
Development of a McAb-based indirect competitive ELISA for the detection of CD58 in goat serum |
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| GAO Ji-zhen,ZHOU Li-mei,WANG Ai-hua,JIN Ya-ping,SONG Yu-min,WU Qing-xia.Development of a McAb-based indirect competitive ELISA for the detection of CD58 in goat serum[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2009,37(8):25-30. |
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| Authors: | GAO Ji-zhen ZHOU Li-mei WANG Ai-hua JIN Ya-ping SONG Yu-min WU Qing-xia |
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| Institution: | (Key Laboratory of Animal Reproductive Endocrinology and Embryo Engineering of Agriculture Ministry of China,College of Veterinary Medicine,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | CD58 protein monoclonal antibody indirect competitive ELISA |
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