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BIRC5对山羊睾丸细胞周期、凋亡的影响
引用本文:但一昕,杨璐,向华,张焕容,任玉鹏,杨发龙,何翃闳,朱江江.BIRC5对山羊睾丸细胞周期、凋亡的影响[J].畜牧兽医学报,2023(4):1511-1524.
作者姓名:但一昕  杨璐  向华  张焕容  任玉鹏  杨发龙  何翃闳  朱江江
作者单位:1. 西南民族大学畜牧兽医学院;2. 青藏高原动物遗传资源保护与利用四川省重点实验室
基金项目:四川省自然科学基金项目(2022NSFSC0082);;四川省科技计划(2020JDJQ0010);;四川省畜禽育种攻关项目(2021YFYZ0003);;浙江省科技计划项目(2022C04017);
摘    要:旨在在克隆山羊BIRC5基因的基础上,通过过表达或者敲低BIRC5基因表达揭示BIRC5基因对山羊睾丸细胞周期和凋亡的调控作用,为进一步完善BIRC5基因功能奠定基础。本研究以3只3日龄3 kg左右健康简州大耳羊公羊脾脏组织为模板,利用RT-PCR技术克隆山羊BIRC5基因CDS区序列,并进行生物信息学分析。将克隆回收产物连接真核表达载体,从而构建pcDNA3.1(+)-BIRC5。根据山羊BIRC5基因序列设计并筛选有效siRNA。将pcDNA3.1(+)-BIRC5和siRNA分别转染山羊睾丸细胞后,利用Western blot检测BIRC5蛋白表达,利用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡,利用实时荧光定量PCR技术检测对凋亡相关基因Bax、Caspase3、Caspase7、Bcl-2、p53、BCL2L11和PARP1的表达。结果,成功扩增山羊BIRC5基因序列,长度为506 bp,包含5′UTR 28 bp, CDS区429 bp, 3′UTR 49 bp,编码142个氨基酸残基,且与牛亲缘关系最近。过表达BIRC5基因后抑制了细胞凋亡,且细胞被阻滞于G2/M+S期;同时可下调Ca...

关 键 词:山羊  BIRC5基因  过表达  干扰  细胞周期  细胞凋亡
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