| 基于RPA-CRISPR/Cas12a技术快速检测犬猫皮肤癣菌方法的建立 |
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| 引用本文： | 郜平平,付金玉,王丽仰,史硕博,张跃平,张迪.基于RPA-CRISPR/Cas12a技术快速检测犬猫皮肤癣菌方法的建立[J].畜牧兽医学报,2023(11):4702-4711. |
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| 作者姓名： | 郜平平 付金玉 王丽仰 史硕博 张跃平 张迪 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业大学动物医学院;2. 北京化工大学北京软物质科学与工程高精尖创新中心 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金(32100156)； |
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| 摘 要： | 旨在建立重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, RPA)结合CRISPR/Cas12a技术的荧光检测方法，以快速、灵敏、可视化检测犬猫皮肤癣菌。以犬小孢子菌、石膏样小孢子菌及须毛癣菌为研究对象，针对真菌内转录间隔区，设计并合成特异性RPA引物和CRISPR RNA(crRNA),建立可同时或分别检测上述皮肤癣菌的荧光检测方法，并评价其检测灵敏度，通过检测临床样本评价本检测方法的敏感性和特异性。结果表明：RPA-CRISPR/Cas12a在37℃、总反应时间30 min的条件下，对三种皮肤癣菌的检测灵敏度可低至单拷贝。对24份临床样本进行检测，以真菌培养和菌落测序结果作为标准，使用可同时识别犬小孢子菌、石膏样小孢子菌及须毛癣菌的皮肤癣菌crRNA(dermatophyte crRNA,crRNA-DM)和可特异性识别犬小孢子菌的犬小孢子菌crRNA(Microsporum canis crRNA,crRNA-Mc)参与RPA-CRISPR/Cas12a反应时，敏感性和特异性均为100%。RPA-CRISPR/Cas12a技术可同时...
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| 关 键 词： | RPA CRISPR/Cas12a 犬猫皮肤癣菌 快速检测 |
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