| 小反刍兽疫病毒感染性cDNA克隆的构建与病毒拯救 |
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| 引用本文： | 王煜,高月异,高金源,刘伟洁,徐慧琳,薛青红.小反刍兽疫病毒感染性cDNA克隆的构建与病毒拯救[J].畜牧兽医学报,2023(7):2956-2963. |
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| 作者姓名： | 王煜 高月异 高金源 刘伟洁 徐慧琳 薛青红 |
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| 作者单位： | 1. 中国兽医药品监察所;2. 青岛易邦生物工程有限公司 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划(2021YFD1800503)； |
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| 摘 要： | 小反刍兽疫病毒(peste des petits ruminants virus, PPRV)是影响全球畜牧业的一种重要病原。本研究旨在建立稳定可靠的PPRV反向遗传操作平台，为解析PPRV致病机理、免疫逃逸机制、病毒复制机制等基础理论研究提供有效的技术平台，同时为开发更加安全、有效的新型疫苗奠定必要的前期基础。通过提取PPRV Clone9株的RNA,采用RT-PCR分6段扩增出PPRV反基因组cDNA,通过酶切、连接出PPRV Clone9株全长反基因组，获得pB-PPRV,同时构建表达PPRV核蛋白(nucleoprotein, N)、磷蛋白(phosphoprotein, P)和大蛋白(large protein, L)的3个辅助质粒。将pB-PPRV与辅助质粒通过脂质体转染BHK-T7细胞。转染3 d后，冻融3次，感染Vero细胞。传至第二代可观察到明显的细胞病变(CPE)。经间接免疫荧光、Western blot、RT-PCR和序列测定鉴定结果表明，拯救出具有感染性的病毒。拯救病毒(rPPRV-Clone9)在Vero细胞上可稳定传代，增殖动态与亲本病毒相似。本研究成功建立...
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| 关 键 词： | 小反刍兽疫病毒 反向遗传 病毒拯救 |
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