| 抗非洲猪瘟病毒NP419L蛋白纳米抗体的筛选鉴定及其在抗体检测中的初步应用 |
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| 引用本文： | 王映,朱家宏,赵加凯,纪品品,陈旭,张路,刘宝元,孙亚妮,赵钦.抗非洲猪瘟病毒NP419L蛋白纳米抗体的筛选鉴定及其在抗体检测中的初步应用[J].畜牧兽医学报,2023(6):2509-2520. |
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| 作者姓名： | 王映 朱家宏 赵加凯 纪品品 陈旭 张路 刘宝元 孙亚妮 赵钦 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物医学院农业农村部国家动物疫病数据中心杨凌观测实验点 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(32273041)； |
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| 摘 要： | 非洲猪瘟(African swine fever, ASF)是猪的一种高度传染性疾病，严重威胁全球养猪业的发展。本研究旨在筛选抗非洲猪瘟病毒(ASF virus, ASFV)NP419L蛋白的纳米抗体并对其在ASF抗体检测中的应用进行初步评价。大肠杆菌表达和Ni-NTA亲和层析纯化等技术表达纯化重组NP419L蛋白；将纯化的重组蛋白免疫双峰驼，5次免疫采集外周血淋巴细胞提取总RNA,经反转录、巢式PCR、酶切、连接和电转化等构建抗NP419L蛋白的噬菌体展示文库；利用噬菌体展示筛淘技术，经三轮筛淘获得抗NP419L蛋白的纳米抗体；构建纳米抗体与辣根过氧化物酶(HRP)融合蛋白的真核表达载体，转染HEK293T细胞，ELISA和间接免疫荧光(IFA)等鉴定融合蛋白的分泌表达及其与NP419L蛋白的结合；竞争ELISA初步评价获得的纳米抗体与HRP融合蛋白在ASF抗体检测中的应用。结果显示，成功制备了纯度较高的预期大小为48 ku的重组NP419L蛋白；构建获得了阳性率为89.5%,库容量为6×108的噬菌体展示文库；筛淘获得了6株抗NP419L蛋白的纳米抗体；分泌表...
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| 关 键 词： | 非洲猪瘟病毒 NP419L蛋白 纳米抗体 |
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