| 白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测 |
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| 引用本文： | 王巧慧,谷建华,郭 欢,吕士凯,吉万全,张 宏.白粉病菌侵染条件下小麦酵母双杂交文库的构建及可用性检测[J].麦类作物学报,2021,41(2):127-133. |
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| 作者姓名： | 王巧慧 谷建华 郭 欢 吕士凯 吉万全 张 宏 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学农学院/旱区作物逆境生物学国家重点实验室,陕西杨凌712100;陕西省留坝县种子管理站,陕西留坝724100 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31971941） |
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| 摘 要： | 为解析白粉病菌侵染小麦以及小麦防御的分子机制,以抗白粉病种质N9134为材料,剪取白粉病菌(Blumeria graminis f.sp.tritici,Bgt)接种48 h后的叶片,提取总RNA,利用SMART技术进行反转录合成双链cDNA(ds-cDNA),并进行均一化处理和SfiI酶切处理,处理后的ds-cDNA分别连接pGADT7-SfiI三框载体,将连接产物转化至感受态细胞HST08中构建文库。通过滴度测定和PCR鉴定其库容量和基因重组率,最后收集细菌并提取质粒。经鉴定,该文库库容量大于1.0×10~6 cfu·mL~(-1),插入片段主要分布在400～2 000 bp之间,重组率为100%,冗余度为3%。利用酵母双杂交系统筛选cDNA文库,获得2个与热休克蛋白HSP40-70互作的蛋白质,分别为DnaJ类蛋白(DnaJ-like)和E3泛素蛋白连接酶AIP2(AIP)。综上表明,文库构建质量较好,为后续筛选抗逆关键基因奠定了基础。
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| 关 键 词： | 白粉菌 小麦 cDNA文库 酵母双杂交 HSP40-70 |
Construction and Utilization of Wheat Yeast Two-Hybrid Library under the Infection of Blumeria graminis f.sp.tritici |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Powdery mildew Wheat cDNA Library Yeast two-hybrid HSP40-70 |
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