| 羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及鉴定 |
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| 引用本文： | 李智,仲亮,白银荣,代兄,应海刚,张七斤.羊口疮病毒B2L基因的原核表达、纯化及鉴定[J].中国动物检疫,2017,34(9):102-106. |
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| 作者姓名： | 李智 仲亮 白银荣 代兄 应海刚 张七斤 |
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| 基金项目： | 国家重点研发计划项目（2017YFD0500900） |
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| 摘 要： | 目的]获取羊口疮病毒B2L基因编码蛋白。方法]根据GenBank上羊口疮病毒ORFV/ShanXi/2011/China株B2L基因序列,设计并合成1对特异性引物,利用PCR方法扩增B2L全基因序列,然后将扩增的B2L基因克隆到PMD18-T载体上;对构建的重组克隆质粒(PMD18-T-B2L)经过测序鉴定后,将目的基因亚克隆到PET-32a(+)原核表达载体上,获得重组表达质粒PET-32a-B2L,然后通过双酶切和测序进行鉴定;将重组菌于37℃、终浓度含1 mM IPTG的LB培养基中,诱导表达3h后进行SDS-PAGE分析;表达的目的蛋白经过层析纯化后,进行Western Blot鉴定。结果]原核表达重组质粒构建成功;SDS-PAGE鉴定发现目的条带的分子量与预期大小相符;纯化的目的蛋白经Western Blot鉴定正确,表明蛋白表达成功。结论]本研究成功构建了羊口疮病毒B2L基因原核表达重组质粒,并成功表达和纯化了B2L蛋白,为后续羊口疮病毒检测方法的建立打下了基础。
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| 关 键 词： | 羊口疮病毒 B2L基因 原核表达 |
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