| 西农萨能羊MAT基因的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 李 芳,罗 军,许会芬,等.西农萨能羊MAT基因的原核表达及多克隆抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2014,42(12):1-6,12. |
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| 作者姓名： | 李 芳 罗 军 许会芬 等 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学 动物科技学院，农业生物技术实验室,西北农林科技大学 动物科技学院，农业生物技术实验室,西北农林科技大学 动物科技学院，农业生物技术实验室 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31072013）；陕西省重大科技创新项目（2009ZKC07-01）；公益性行业（农业）科研专项（201103038） |
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| 摘 要： | 【目的】制备高特异性、高效价的乙酰/丙二酸单酰转移酶(MAT)多克隆抗体,为研究山羊MAT在脂肪酸代谢中的功能奠定基础。【方法】采用PCR方法扩增奶山羊的MAT基因,将其亚克隆到pET32a(+)载体得到pET32a(+)-MAT原核表达载体,并转化到大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达。使用Ni-NTA琼脂糖亲和层析柱纯化融合蛋白,纯化的MAT蛋白经复性后进行活性检测。采用皮下免疫法将纯化的MAT蛋白免疫兔子制备多克隆抗体,用ELISA和Western blot检测血清多克隆抗体的效价和特异性。【结果】PCR扩增得到981bp的MAT基因编码区;成功构建了pET32a(+)-MAT原核表达载体,诱导表达获得了56ku的重组蛋白。活性检测表明,复性后的MAT具有转移酶活性,ELISA检测显示抗体效价达1∶128 000,经Western blot鉴定,制备的多克隆抗体能特异性检测原核表达的MAT蛋白以及在HEK-293细胞中表达的MAT蛋白。【结论】获得了具有酶活性的MAT蛋白以及高特异性、高效价的兔抗MAT多克隆抗体,为研究MAT在脂肪酸代谢中的功能提供了重要的试验工具。
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| 关 键 词： | 奶山羊MAT基因 原核表达 亲和纯化 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2013/8/16 0:00:00 |
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