| 以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒 |
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| 引用本文： | 王冲,陈集双,洪健,杜志游,张华荣,陈绍宁.以18S rRNA为内参照的多重RT-PCR检测3种百合病毒[J].植物病理学报,2006,36(3):204-211. |
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| 作者姓名： | 王冲 陈集双 洪健 杜志游 张华荣 陈绍宁 |
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| 作者单位： | 1. 浙江理工大学生物工程研究所, 杭州 310018;2. 浙江大学实验中心, 杭州 310029 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863计划) |
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| 摘 要： | 本研究对多重PCR体系各成分和循环参数进行了摸索和优化,建立了以18SrRNA为内参照的同时检测3种百合病毒的多重RT-PCR体系,所检测的3种病毒是黄瓜花叶病毒(CMV)、百合斑驳病毒(LMoV)和百合无症病毒(LSV)。它们为侵染我国百合的主要病毒。在RT反应体系中加入3种病毒和18S rRNA的特异性反向引物的混合物,使反应体系中各反向引物终浓度均为0.5μmol/L,反转录酶(AMV)反转录合成各病毒和18SrRNA的互补第一链cDNAs。多重RT-PCR条件实验显示:将标准RT-PCR体系中的Taq HS DNA聚合酶量改为0.100U/μL,Mg2+浓度改为4.0mmol/L,各引物浓度选择0.2μmol/L,那么25个循环反应以上就能在一个反应管中以18SrRNA为内参照同时检测百合中的3种常见病毒。用该体系检测了10个百合样品,同时与32P同位素标记膜杂交检测作对照,结果显示,该检测体系检测灵敏度更高。
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| 关 键 词： | 百合病毒 内参照 多重RT-PCR 18S RRNA 分子检测 |
| 文章编号： | 0412-0914(2006)03-0204-08 |
| 收稿时间： | 2005-01-24 |
| 修稿时间： | 2005年1月24日 |
Optimization and application of a multiplex RT-PCR system for simultaneous detection of three lily viruses using 18S rRNA as internal control |
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| WANG Chong,CHEN Ji-shuang,HONG Jian,DU Zhi-you,ZHANG Hua-rong,CHEN Shao-ning.Optimization and application of a multiplex RT-PCR system for simultaneous detection of three lily viruses using 18S rRNA as internal control[J].Acta Phytopathologica Sinica,2006,36(3):204-211. |
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| Authors: | WANG Chong CHEN Ji-shuang HONG Jian DU Zhi-you ZHANG Hua-rong CHEN Shao-ning |
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| Institution: | 1. Institute of Bioengineering, Zhejiang Sci-Tech University, Hangzhou 310018, China;2. Center of Analysis and Measurement, Zhejiang University, Hangzhou 310029, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | 18S rRNA |
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