| 木薯Ⅴ型几丁质酶MeCHITVb基因克隆及其表达载体构建 |
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| 引用本文： | 丁云,陈松笔,李开绵,蔡杰.木薯Ⅴ型几丁质酶MeCHITVb基因克隆及其表达载体构建[J].分子植物育种,2021,19(21):7113-7121. |
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| 作者姓名： | 丁云 陈松笔 李开绵 蔡杰 |
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| 作者单位： | 海南大学园艺学院,海口,570228;中国热带农业科学院热带作物品种资源研究所,农业农村部木薯种质资源保护与利用重点实验室,海口,571101 |
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| 摘 要： | 几丁质酶在生物逆境环境和非生物逆境环境中发挥着重要作用.为研究木薯几丁质酶在响应低温胁迫下的分子作用机制,利用RT-PCR技术,从木薯耐低温品种SC124中克隆到CHITVb基因,利用平末端连接技术构建pEASY-MeCHITVb克隆载体,用于测序确定目标基因序列,并对其序列进行分析,构建植物表达载体.结果 表明,成功克隆木薯CHITVb基因,命名为MeCHITVb.通过生物信息学分析,该基因全长1050 bp,编码349个氨基酸,理论相对分子量为38.08 kD,理论等电点为4.53,是一种稳定蛋白.经序列比对和系统进化树分析表明,MeCHITVb基因与烟草、拟南芥V型几丁质酶基因亲缘关系最近.用pEASY-MeCHITVb与植物表达载体pISV2678构建重组子pISV-MeCHITVb,利用"Golden Gate"克隆方法构建基因编辑载体CRISPR/Cas9-MeCHITVb.将植物过表达的pISV-MeCHITVb和CRISPR/Cas9-MeCHITVb载体成功转化为根状杆菌LBA4404.本研究为后续MeCHITVb基因功能研究、木薯抗寒、抗病品种的选育及木薯北移栽培提供理论依据.
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| 关 键 词： | 木薯(Manihot esculenta Crantz) Ⅴ型几丁质酶 植物表达载体 抗寒性 |
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