| 马蓝IGPS基因的克隆、表达分析及原核表达 |
| |
| 引用本文： | 蔡国倩,宁书菊,叶齐,胡永乐,马小毛,魏道智.马蓝IGPS基因的克隆、表达分析及原核表达[J].热带作物学报,2021,42(8):2167-2174. |
| |
| 作者姓名： | 蔡国倩 宁书菊 叶齐 胡永乐 马小毛 魏道智 |
| |
| 作者单位： | 1.福建农林大学生命科学学院/福建省农业生态过程与安全监控重点实验室,福建福州 3500022.福建农林大学农学院/作物生态与分子生理学福建省高校重点实验室,福建福州 3500023.武夷学院生态与资源工程学院,福建武夷山 354300 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金面上项目(81573517);福建省自然科学基金面上项目(2019J01827);福建农林大学科技创新专项基金项目(CXZX2020011A) |
| |
| 摘 要： | 吲哚-3-甘油磷酸合酶（indole-3-glycerol phosphate synthase,IGPS）是广泛参与生物体内色氨酸、生长素等吲哚化合物合成途径中重要的关键酶之一。为了研究BcIGPS在马蓝吲哚类生物碱合成中的作用,基于马蓝转录组数据,通过RT-PCR技术从马蓝中克隆得到IGPS基因序列,命名为BcIGPS;利用生物信息学分析BcIGPS序列特性;运用qPCR分析BcIGPS在马蓝不同器官及外源诱导处理下的时空表达情况;构建pET-32a-BcIGPS原核表达载体,并优化诱导表达条件。结果表明：BcIGPS（GenBank登录号：MT210517）全长为1176 bp,包含1个开放阅读框（ORF）,编码392个氨基酸,具丝氨酸（Ser）、苏氨酸（Thr）、酪氨酸（Tyr）磷酸化位点31个,无跨膜结构,无信号肽,亚细胞定位于叶绿体中。BcIGPS含有product（indole）活性结构域和IGPS、TrpC特异性位点。qPCR分析结果显示,BcIGPS基因在不同器官的相对表达丰度依次为：叶>茎>花>根;其响应茉莉酸甲酯（MeJA）、脱落酸（ABA）、水杨酸（SA）、乙烯利（ETH）外源诱导信号的诱导,经MeJA和ETH处理后,分别在24 h和36 h最高,为初始水平的5.53、6.87倍;在SA处理下,BcIGPS表达响应最为强烈,呈先骤升后骤降的变化趋势,在12 h最高达初始水平的33.13倍;ABA处理后,其表达量变化不显著。所构建的pET-32a-BcIGPS原核表达载体在大肠杆菌BL21中表达,其最适条件为37 ℃、0.4 mmol/L IPTG培养3 h,BcIGPS重组蛋白主要以包涵体形式存在,且蛋白分子量与预测相符。
|
| 关 键 词： | 马蓝 BcIGPS 基因克隆 表达分析 原核表达 |
| 收稿时间： | 2020-07-23 |
Cloning,Expression Analysis and Prokaryotic Expression of IGPS from Baphicacanthus cusia |
| |
| CAI Guoqian,NING Shuju,YE Qi,HU Yongle,MA Xiaomao,WEI Daozhi.Cloning,Expression Analysis and Prokaryotic Expression of IGPS from Baphicacanthus cusia[J].Chinese Journal of Tropical Crops,2021,42(8):2167-2174. |
| |
| Authors: | CAI Guoqian NING Shuju YE Qi HU Yongle MA Xiaomao WEI Daozhi |
| |
| Institution: | 1. College of Life Science, Fujian Agriculture And Forestry University / Fujian Key Provincial Laboratory of Agroecological Processing and Safety Monitoring, Fuzhou, Fujian 350002, China2. College of Agriculture, Fujian Agriculture and Forestry University / Key Laboratory of Crop Ecology and Molecular Physiology, Fuzhou, Fujian 350002, China3. College of Ecology and Resource Engineering, Wuyi Wniversity, Wuyishan, Fujian 354300, China |
| |
| Abstract: | |
| |
| Keywords: | Baphicacanthus cusia BcIGPS gene cloning expression analysis prokaryotic expression |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
| 点击此处可从《热带作物学报》浏览原始摘要信息 |
| 点击此处可从《热带作物学报》下载免费的PDF全文 |
|
