| 香蕉束顶病毒Haikou 2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备 |
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| 引用本文： | 谭老喜,王洪星,张雨良,王健华,章绍延,周朋,余乃通,刘志昕.香蕉束顶病毒Haikou 2分离物DNA2编码框原核表达及抗血清制备[J].热带作物学报,2012,33(12):2246-2251. |
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| 作者姓名： | 谭老喜 王洪星 张雨良 王健华 章绍延 周朋 余乃通 刘志昕 |
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| 作者单位： | 1. 海南大学环境与植物保护学院,海南海口570228;中国热带农业科学院热带生物技术研究所 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 海南海口 571101
2. 中国热带农业科学院热带生物技术研究所 农业部热带作物生物学与遗传资源利用重点实验室 海南海口 571101 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（No. 31070131）；国家科技支撑计划课题（No. 2007BAD48B01）；中央级公益性科研院所基本科研业务专项（No. ITBB110303）。 |
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| 摘 要： | 香蕉束顶病毒(Banana bunchy top virus,BBTV)是危害香蕉的主要病毒之一,严重威胁着香蕉的生产.BBTV基因组至少由6个环状ssDNA组分组成,其中DNA2组分变异最大,是否编码蛋白及其功能缺乏研究.本研究通过PCR方法克隆了BBTV Haikou2 DNA2ORF,将其构建到pET32a载体中,进行原核表达和抗血清制备.结果表明重组表达载体pET32a-DNA2ORF在表达菌Transetta(DE3)中表达一个约21 ku的特异融合蛋白,通过超声波破碎仪破碎细胞和诱导条件优化,分析表明,该蛋白主要以可溶形式存在,最佳表达条件为30℃、1.0 mmol/L IPTG诱导3h.融合蛋白经过Ni2+-NTA琼脂糖亲和层析纯化,免疫家兔制备出抗血清.Western blot实验表明抗血清具有特异性; 酶联法(ID-ELISA)测定表明,抗血清效价达到25 000,能够检测出香蕉汁液中加入的0.954 μg/mL浓度的表达纯化蛋白.
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| 关 键 词： | 香蕉束顶病毒Haikou2分离物 BBTVDNA2 原核表达 抗血清制备 |
Prokaryotic Expression of DNA2 ORF of BBTV Haikou2 Isolate and Preparation of Polyclonal Antibody |
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| TAN Laoxi,WANG Hongxing,ZHANG Yuliang,WANG Jianhu,ZHANG Shaoyan,ZHOU Peng,YU Naitong and LIU Zhixin.Prokaryotic Expression of DNA2 ORF of BBTV Haikou2 Isolate and Preparation of Polyclonal Antibody[J].Chinese Journal of Tropical Crops,2012,33(12):2246-2251. |
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| Authors: | TAN Laoxi WANG Hongxing ZHANG Yuliang WANG Jianhu ZHANG Shaoyan ZHOU Peng YU Naitong and LIU Zhixin |
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