| 基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体 |
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| 引用本文： | 张晟,黎海燕,廉梅,刘宇,肖东,林晓琳.基于四环素调控系统构建白蛋白启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体[J].动物医学进展,2019,40(8):29-33. |
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| 作者姓名： | 张晟 黎海燕 廉梅 刘宇 肖东 林晓琳 |
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| 作者单位： | 南方医科大学基础医学院细胞生物学教研室,广东广州,510515;南方医科大学实验动物中心,广东广州,510515;南方医科大学基础医学院肿瘤研究所,广东广州 510515;南方医科大学实验动物中心,广东广州 510515;南方医科大学基础医学院肿瘤研究所,广东广州,510515 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金;广东省科技计划 |
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| 摘 要： | 基于四环素调控系统构建白蛋白(albumin,Alb)启动子调控大鼠uPA(urokinase-type plasminogen activator,ruPA)转基因肝特异性过表达的慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG)。以CTG0875-2-11质粒为模板,PCR扩增大鼠的uPA(ruPA)基因,3’端添加Flag标签,In-Fusion克隆至pLVX-Alb-TetOne-TRE-T2A-CopGFP(pLATTTG)质粒中,得到慢病毒载体pLVX-Alb-TetOne-TRE-ruPA-T2A-CopGFP(pLATTRUTG),所构建质粒经测序和酶切鉴定。将pLATTRUTG瞬时转染293T细胞,转染后24 h倒置荧光显微镜检测CopGFP表达;接着向6孔细胞培养板内加入强力霉素(Doxycycline,Dox),48 h后在倒置荧光显微镜下观察CopGFP表达(包括未加Dox的孔),随后收集细胞以提取总RNA和总蛋白,用于RT-qPCR检测ruPA及报告基因表达和Western blot检测标签蛋白Flag表达。酶切和测序确证我们成功构建了慢病毒载体pLATTRUTG;瞬转293T细胞后,24 h倒置荧光显微镜下可见零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光,加Dox 48 h后所有细胞展现强的绿色荧光,而不加Dox的孔内仍然只见到零星细胞(约占0.1%)发弱的绿色荧光。RT-qPCR和Western blot检测结果显示,与不加Dox的细胞相比,加Dox的细胞中ruPA、报告基因CopGFP和Flag表达水平显著升高。结果提示,成功基于四环素调控系统构建Alb启动子调控大鼠uPA转基因表达的慢病毒载体pLATTRUTG,为相关后续实验奠定了基础。
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| 关 键 词： | 白蛋白启动子 大鼠尿激酶 桡足类绿色荧光蛋白 四环素调控系统 慢病毒载体 |
Construction of a Lentiviral Vector Harboring all-in-one Tet-On 3G System for Rat uPA Transgene Expression under the Control of Alb Promoter |
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| ZHANG Sheng,LI Hai-yan,LIAN Mei,LIU Yu,XIAO Dong,LIN Xiao-lin.Construction of a Lentiviral Vector Harboring all-in-one Tet-On 3G System for Rat uPA Transgene Expression under the Control of Alb Promoter[J].Progress In Veterinary Medicine,2019,40(8):29-33. |
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| Authors: | ZHANG Sheng LI Hai-yan LIAN Mei LIU Yu XIAO Dong LIN Xiao-lin |
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| Institution: | (Department of Cell Biology,School of Basic Medical Sciences,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China;Cancer Research Institute,School of Basic Medical Sciences,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China;Laboratory Animal Center,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China) |
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| Abstract: | ZHANG Sheng;LI Hai-yan;LIAN Mei;LIU Yu;XIAO Dong;LIN Xiao-lin(Department of Cell Biology,School of Basic Medical Sciences,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China;Cancer Research Institute,School of Basic Medical Sciences,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China;Laboratory Animal Center,Southern Medical University,Guangzhou,Guangdong,510515,China) |
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| Keywords: | albumin(Alb) promoter ruPA(rat urokinase-type plasminogen activator) copGFP Tet-On system lentivirus vector |
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