| 表达EPEC紧密素蛋白重组嗜酸乳酸杆菌的免疫效果检测 |
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| 引用本文： | 郝凤奇,李景梅,杨洲红.表达EPEC紧密素蛋白重组嗜酸乳酸杆菌的免疫效果检测[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(6):28-34,40. |
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| 作者姓名： | 郝凤奇 李景梅 杨洲红 |
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| 作者单位： | 长春理工大学 生命科学技术学院,长春理工大学 生命科学技术学院,长春理工大学 生命科学技术学院 |
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| 基金项目： | 吉林省科技发展计划项目(20090246，201101004) |
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| 摘 要： | 【目的】制备抗肠致病性大肠杆菌(EPEC)的重组嗜酸乳酸杆菌,并初步探索其免疫效果。【方法】采用DNAStar软件选取EPEC E2348/69的eae全基因中抗原性较高的984bp片段(编码328个氨基酸残基,命名为eae Int328)为目标序列,以EPEC E2348/69基因组为模板,PCR扩增eae Int328基因,构建重组表达载体pSIP409-eae Int328,电转化法获得相应的重组嗜酸乳酸杆菌,采用SppIP诱导重组菌表达,并通过SDS-PAGE和Western-blot鉴定重组蛋白。以BALB/c雌性小鼠为受试动物,灌胃重组嗜酸乳酸杆菌15d后,再灌胃EPEC,第21天,取结肠PP结和肠内容物,15和21d称体质量,同时设PBS(对照)、EPEC和pSIP409空载体转化嗜酸乳酸杆菌处理。采用流式细胞术检测结肠PP结中的CD11c+DC、CD4+T、CD19+B细胞比例,采用ELISA检测肠内容物中的特异性sIgA水平。【结果】克隆得到了984bp的eae Int328基因,构建了重组质粒pSIP409-eae Int328,制备了相应的重组嗜酸乳酸杆菌,用SppIP诱导表达后,重组嗜酸乳酸杆菌表达了分子质量约为36ku的重组蛋白,该重组蛋白与eae单克隆抗体可发生特异性结合。与EPEC和pSIP409空载体转化嗜酸乳酸杆菌组相比,21d时,pSIP409重组嗜酸乳酸杆菌组小鼠体质量显著增加,且与PBS组小鼠无显著差异。该重组嗜酸乳酸杆菌可显著提高BALB/c小鼠结肠PP结中的CD19+B细胞比例,极显著提高结肠PP结中的CD11c+DC和CD4+T细胞比例,使肠道黏膜产生针对EPEC的特异性sIgA。【结论】pSIP409-eae Int328重组嗜酸乳酸杆菌通过CD11c+DC的介导,促进CD4+T细胞数量增加,进而诱导B细胞活化产生针对EPEC的特异性sIgA,进而对小鼠EPEC的急性感染发挥作用。
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| 关 键 词： | 肠致病性大肠杆菌 eae基因 重组嗜酸乳酸杆菌 |
| 收稿时间： | 2015/3/12 0:00:00 |
Detecting immune efficacy of recombinant Lactobacillus acidophilus expressing enteropathogenic Escherichia coli |
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| HAO Feng-qi,LI Jing-mei and YANG Zhou-hong.Detecting immune efficacy of recombinant Lactobacillus acidophilus expressing enteropathogenic Escherichia coli[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(6):28-34,40. |
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| Authors: | HAO Feng-qi LI Jing-mei and YANG Zhou-hong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | EPEC eae gene recombinant Lactobacillus acidophilus |
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