| 莱茵衣藻“细菌型”pepc2基因叶绿体表达及其对油脂蛋白质含量的影响 |
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| 引用本文： | 冯思豫,施定基,贾晓会,朱嘉诚,米华玲,贾睿,何培民.莱茵衣藻“细菌型”pepc2基因叶绿体表达及其对油脂蛋白质含量的影响[J].上海海洋大学学报,2017,26(5):641-650. |
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| 作者姓名： | 冯思豫 施定基 贾晓会 朱嘉诚 米华玲 贾睿 何培民 |
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| 作者单位： | 上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306,上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306;中国科学院植物研究所, 北京 100093,上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306,上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306,中国科学院上海生命科学研究院植物生理生态研究所, 上海 200032,上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306,上海海洋大学 水产与生命学院, 上海 201306 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划（2009AA064401） |
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| 摘 要： | 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（Phosphoenolpyruvate carboxylase，PEPC，EC 4.1.1.31）在植物碳代谢中有重要作用，高等植物中PEPC可以调控蛋白质和脂肪酸含量，但是对绿藻PEPC的研究还较少。莱茵衣藻是绿藻中的模式生物，其基因工程中外源基因的转化以叶绿体转化效率最高，为了提高外源蛋白表达和获得高产油莱茵衣藻，利用叶绿体转化法能进一步提高表达效率。因此，本研究首先克隆了莱茵衣藻“细菌型”PEPCCSⅠ（conserved sequenceⅠ）的639 bp，构建了pASapI-reve-Crpepc2和pASapI-forw-Crpepc2正反向叶绿体表达载体，并用基因枪法转化莱茵衣藻cc-400获得了空质粒型，正向型和反向型转基因藻株。其次，应用RT-qPCR方法检测Crpepc2的相对表达量，结果表明反向型Crpepc2的表达量减少了89.97%，而正向型增加了201.16%。最后，检测了总蛋白和脂质含量的变化，正向型突变株的总蛋白增加了37.03%；而反向型突变株的脂质含量增加了70.32%，且不饱和脂肪酸含量明显增加。以上结果证明莱茵衣藻“细菌型”PEPC的叶绿体表达不仅可以进一步提高蛋白质与脂肪酸含量，也可为今后外源蛋白的表达和高产油工程藻的应用做贡献。
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| 关 键 词： | 莱茵衣藻 磷酸烯醇式丙酮酸羧化酶（PEPC） 叶绿体表达 RT-qPCR 脂肪酸 蛋白质 |
| 收稿时间： | 2016/12/5 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2017/5/12 0:00:00 |
Regulation and expression of bacteria type pepc2 in Chlamydomonas reinhardtiiand and its effect on protein and lipid content |
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| FENG Siyu,SHI Dingji,JIA Xiaohui,ZHU Jiacheng,MI Hualing,JIA Rui and HE Peimin.Regulation and expression of bacteria type pepc2 in Chlamydomonas reinhardtiiand and its effect on protein and lipid content[J].Journal of Shanghai Ocean University,2017,26(5):641-650. |
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| Authors: | FENG Siyu SHI Dingji JIA Xiaohui ZHU Jiacheng MI Hualing JIA Rui and HE Peimin |
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| Institution: | College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China;Institute of Botany, Chinese Academy of Sciences, Beijing 100093, China,College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China,Institute of Plant Physiology and Ecology, Shanghai Institutes for Biological Sciences, Chinese Academy of Sciences, Shanghai 200032, China,College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China and College of Fisheries and Life Science, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Chlamydomonas reinhardtii phosphoenolpyruvate carboxylase (PEPC) chloroplast expression RT-qPCR fatty acid protein |
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