| 非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 李杰,张星星,郭晶,孟庆玲,乔军,张国武,王晓婷,李妍,才学鹏.非洲猪瘟病毒p30-54融合蛋白基因的构建、表达及其多克隆抗体制备[J].河南农业科学,2018(9). |
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| 作者姓名： | 李杰 张星星 郭晶 孟庆玲 乔军 张国武 王晓婷 李妍 才学鹏 |
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| 作者单位： | 石河子大学动物科技学院;新疆农垦科学院省部共建绵羊遗传改良与健康养殖国家重点实验室;中国农业科学院兰州兽医研究所 |
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| 摘 要： | 为了制备反应原性良好的非洲猪瘟病毒(ASFV)血清学诊断抗原,根据ASFV p30和p54基因序列,通过大肠杆菌密码子优化后分别体外合成全长的p30和p54基因,利用重叠延伸PCR(SOE-PCR)将2个基因片段串联,构建p30-54融合基因。将构建的融合基因片段克隆入p ET-28a(+)表达载体中,构建原核表达载体p ET-p30-54,转化至E. coli BL21(DE3)感受态细胞中,用IPTG诱导表达,检测融合蛋白的反应原性,并制备抗该融合蛋白的多克隆抗体。SDS-PAGE检测结果显示,表达的p30-54融合蛋白分子质量为47. 1 ku; Western blot分析显示,该融合蛋白可被ASFV阳性血清特异性识别,表明其具有良好的反应原性。将p30-54融合蛋白用Ni-NTA亲和层析柱纯化后免疫小鼠,成功制备了抗ASFV p30-54融合蛋白多克隆抗体。
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