| 小金海棠质膜H+-ATPase基因(MxHA2)的克隆及功能分析 |
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| 引用本文： | 槐心体,王忆,张倩,张新忠,韩振海.小金海棠质膜H+-ATPase基因(MxHA2)的克隆及功能分析[J].农业生物技术学报,2012,20(10):1135-1142. |
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| 作者姓名： | 槐心体 王忆 张倩 张新忠 韩振海 |
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| 作者单位： | 中国农业大学园艺植物研究所/北京市果树逆境生理与分子生物学重点实验室,北京,100193 |
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| 基金项目： | 国家高技术研究发展计划(863)项目(2011AA001204);现代农业产业技术体系岗位专家项目(CARS-28);国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08009-122B) |
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| 摘 要： | 植物质膜H+-ATPase能把质子泵出根外酸化土壤,增加铁的溶解度,利于植物对铁的吸收.小金海棠是一个苹果铁高效基因型砧木,为研究质膜H+-ATPase在小金海棠铁吸收过程中的功能,本研究通过同源克隆的方法从小金海棠(Malus xiaojinensis)中克隆到了一条全长2865 bp含有完整编码区的质膜H+-ATPase基因(MxHA2),编码954个氨基酸(GenBank登录号:JQ867095).系统进化分析结果表明MxHA2蛋白与碧桃(Prunus persica)的PPA2蛋白亲缘关系较近.基因枪法在洋葱(Allium cepa)表皮内进行亚细胞定位分析,结果表明,MxHA2与GFP的融合蛋白定位于细胞膜上.荧光定量PCR分析表明,缺铁胁迫后,MxHA2基因在根和叶中均有不同程度的增强.把MxHA2基因转化到酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)(BJ2168)后,转MxHA2的酿酒酵母H+-ATPase活性极显著增强,且缺铁处理后其生长量持续高于对照,表明该基因编码的蛋白具有H+-ATPase活性,其过量表达能提高酵母菌株的耐缺铁性.结果提示,MxHA2可能在小金海棠的耐缺铁胁迫过程中起重要作用,为进一步研究小金海棠的铁高效机理提供了依据,在果树耐缺铁分子育种上有重要的应用前景.
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| 关 键 词： | 小金海棠 缺铁胁迫 表达分析 亚细胞定位 酵母转化 |
Cloning and Function Analysis of Plasma Membrane H~+-ATPase Gene (MxHA2) from Malus xiaojinensis |
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| HUAI Xin-Ti
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WANG Yi
,
ZHANG Qian
,
ZHANG Xin-Zhong
,
HAN Zhen-Hai.Cloning and Function Analysis of Plasma Membrane H~+-ATPase Gene (MxHA2) from Malus xiaojinensis[J].Journal of Agricultural Biotechnology,2012,20(10):1135-1142. |
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| Authors: | HUAI Xin-Ti WANG Yi ZHANG Qian ZHANG Xin-Zhong HAN Zhen-Hai |
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| Institution: | * Institute for Horticultural Plants, China Agricultural University/Key Laboratory of Beijing Municipality of Stress Physiology and Molecular Biology for Fruit Tree, Beijing 100193, China |
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