| 口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达 |
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| 引用本文： | 杨彬,胡永浩,等.口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因的克隆及其在大肠埃希氏菌中的表达[J].中国兽医科技,2003,33(3):3-8. |
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| 作者姓名： | 杨彬 胡永浩 |
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| 作者单位： | [1]中国农业科学院兰州兽医研究所，甘肃兰州730046 [2]甘肃农业大学动物医学院，甘肃兰州730070 |
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| 摘 要： | 利用RT-PCR技术。用包容口蹄疫病毒完整VP1基因的引物从口蹄疫分离株（China/99-2)中扩增得到一级750bp的DNA片段，克隆后，经对该片段的核苷酸序列进行测序和同源性比较。显示其与国外同源参考序列（O1K/66）的同源性为80.44%。与国内同型参考株（HB/WH/99）的核苷酸序列的同源性达99.06%。随后以重组质粒pGEM-VP1为模板，用特异性表达引物扩增得到目的基因VP1(650bp)。对目的基因和表达载体pGEX-4T-1分别以相同的限制性内切酶酶切后构建成重组表达载体。转化宿 主菌BL21（DE3）后得到重组质粒pGEX-VP1。经酶切及PCR鉴定筛选出阳性克隆。测序证明目的基因正确插入到表达载体。用IPTG诱导VP1基因的表达。收集不同时间的菌液进行SDS-PAGE电泳，Western-blotting分析检测。结果表明，结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中表达，表达产物的分子量约为53ku，并能被口蹄疫阳性血清所识别，经薄层扫描分析，表达蛋白约占菌体蛋白总量的20.00%。证明口蹄疫病毒结构蛋白VP1基因可在大肠埃希氏菌中高效表达，且表达产物有一定的生物学活性。
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| 关 键 词： | 口蹄疫 病毒结构 蛋白VP1基因 克隆 大肠埃希氏菌 基因表达 动物 |
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