| 丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建 |
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| 引用本文： | 张婷婷,王春丽,韩蕊莲.丹参C4H基因pET32a原核表达载体的构建[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2011,39(7):158-162. |
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| 作者姓名： | 张婷婷 王春丽 韩蕊莲 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学生命科学学院;中国科学院水利部水土保持研究所;天津天士力现代中药资源有限公司; |
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| 基金项目： | 国家“十一五”科技支撑计划项目(2008BAD98B08-3) |
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| 摘 要： | 【目的】克隆丹参中肉桂酸-4-羟化酶基因(SmC4H)的核心区,并构建SmC4H基因的原核表达载体。【方法】设计合成SmC4H基因全长引物,应用PCR克隆SmC4H基因的编码区并添加酶切位点,应用EcoRⅤ、NotⅠ双酶切SmC4H-pGM-T后与原核表达载体pET32a连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行双酶切鉴定,诱导表达重组蛋白并进行SDS-PAGE电泳以及Western Blot分析。【结果】克隆得到了1 200 bp大小的基因片段,经测序鉴定其为SmC4H基因片段;连接表达载体测序结果表明,SmC4H-pET32a构建成功,其诱导表达蛋白经SDS-PAGE检测及Western Blot分析发现,重组蛋白表达效果较好,且主要以包涵体形式存在。【结论】成功构建了SmC4H-pET32a原核表达载体,并成功诱导了SmC4H-pET32a重组蛋白的表达。
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| 关 键 词： | 丹参 肉桂酸-4-羟化酶 pET32a 原核表达载体 |
| 收稿时间： | 2010/12/13 0:00:00 |
Construction of pET32a prokaryotic expression vector of C4H gene in Salvia miltiorrhiza |
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| ZHANG Ting-ting,WANG Chun-li,HAN Rui-lian,LIU Yan,ZHAO Wang-sheng,LIANG Zong-suo.Construction of pET32a prokaryotic expression vector of C4H gene in Salvia miltiorrhiza [J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2011,39(7):158-162. |
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| Authors: | ZHANG Ting-ting WANG Chun-li HAN Rui-lian LIU Yan ZHAO Wang-sheng LIANG Zong-suo |
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| Institution: | ZHANG Ting-ting1,WANG Chun-li1,HAN Rui-lian2,LIU Yan3,ZHAO Wang-sheng1,LIANG Zong-suo1,2(1 College of Life Sciences,Northwest A&F University,Yangling,Shaanxi 712100,China,2 Institute of Soil and Water Conservation,Chinese Acedemy of Sciences&Ministry of Water Resources,3 Tianjin Tasly Modern TCM Resources Co.,Ltd,Tianjin 300410,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Salvia miltiorrhiza cinnamic acid-4-hydroxylase pET32a induced expression vector |
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