| 重组产气荚膜梭菌ε毒素三点突变体的融合表达及其免疫活性分析 |
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| 引用本文： | 杜吉革,张秀坤,朱真,薛麒,李启红,印春生,彭小兵,王磊,姚文生,康 凯,陈小云.重组产气荚膜梭菌ε毒素三点突变体的融合表达及其免疫活性分析[J].中国兽药杂志,2018,52(7):27-33. |
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| 作者姓名： | 杜吉革 张秀坤 朱真 薛麒 李启红 印春生 彭小兵 王磊 姚文生 康 凯 陈小云 |
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| 作者单位： | 中国兽医药品监察所 |
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| 基金项目： | 科技部十三五“牛羊重要疫病免疫防控新技术研究”重点专项课题(2017WFD0500903)；中国兽医药品监察所所级课题(201702)。 |
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| 摘 要： | 为获得并评价重组产气荚膜梭菌ε毒素(ETX)三点突变体蛋白的毒力及免疫活性,对已知的D型产气荚膜梭菌ETX编码基因进行优化设计,同时引入包括第30和196位酪氨酸突变为丙氨酸,及第106位组氨酸突变为脯氨酸共3个氨基酸突变,并在该基因5'端添加Th细胞表位(T)和鞭毛蛋白(flagellin)N末端编码序列,经人工合成获得基因片段GTFNETXm3。随后,将该基因片段克隆至原核表达载体p ET30a-(+),转染BL21(DE3)菌诱导表达、纯化,从而获得重组蛋白,进而利用Western blot方法检测重组蛋白与D型产气荚膜梭菌抗血清的反应性,并检测其对犬肾细胞系(MDCK细胞)及小鼠的毒力。最后,将重组蛋白与Montanide ISA 201佐剂混合乳化制备疫苗,免疫4只健康家兔,根据《中华人民共和国兽药典》(2015年版)规定的方法检测一免及二免后兔血清的中和抗体效价。结果显示,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,且能与D型产气荚膜梭菌毒素抗血清反应;100μg/m L的重组蛋白未显示细胞毒性;6.25 mg/kg剂量的重组蛋白对小鼠无致死性;每毫升的一免抗血清可中和80~120个最小致死量(MLD)、二免抗血清可中和750~1100个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素;用1个MLD的D型产气荚膜梭菌毒素攻毒后,对照组家兔4/4死亡,免疫组家兔4/4保护。试验表明,产气荚膜梭菌ETX三点突变体的毒力基本消失,且保留了良好的免疫原性,是D型产气荚膜梭菌病基因工程亚单位疫苗的理想候选抗原蛋白。
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| 关 键 词： | 产气荚膜梭菌ε毒素 突变体 Th细胞表位 鞭毛蛋白 抗原性 |
| 收稿时间： | 2018/1/12 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2018/7/6 0:00:00 |
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