| 番茄褪绿病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法 |
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| 引用本文： | 孙晓辉,高利利,刘锦,王少立,乔宁,刘永光,赵静,竺晓平.番茄褪绿病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法[J].植物病理学报,2018(5). |
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| 作者姓名： | 孙晓辉 高利利 刘锦 王少立 乔宁 刘永光 赵静 竺晓平 |
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| 作者单位： | 山东农业大学植物保护学院山东省蔬菜病虫生物学重点实验室山东果蔬优质高效生产协同创新中心;荣成市港湾街道办事处;潍坊科技学院 |
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| 摘 要： | 根据番茄褪绿病毒(Tomato chlorosis virus,ToCV)热激蛋白70(Hsp70)的基因序列,设计ToCV实时荧光定量PCR特异引物。利用重组质粒ToCV-1为标准品建立SYBR Green Ⅰ实时荧光定量方法。针对引物浓度、退火温度、特异性、灵敏度、重复性和稳定性进行系列优化。结果表明,最适退火温度为63℃,最适引物浓度为0.3μmol·L~(-1)。熔解曲线为特异性单峰,表明其特异性良好。建立的SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR较常规PCR灵敏100倍,且具有良好的重复性和稳定性。基于SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR技术建立的ToCV检测方法,速度快、特异性强、灵敏度高、重复性好,可以用于ToCV的定量检测。
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