| 基于PEDV M基因RT-LAMP快速检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 陈希文,尹苗,汪谦,杨勤,杨凤,李莲,罗文涛,周杰珑,马缨,赵洪.基于PEDV M基因RT-LAMP快速检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报,2018(9). |
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| 作者姓名： | 陈希文 尹苗 汪谦 杨勤 杨凤 李莲 罗文涛 周杰珑 马缨 赵洪 |
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| 作者单位： | 绵阳师范学院动物应用技术研究所;四川铁骑力士集团冯光德实验室;西南林业大学生命科学学院 |
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| 摘 要： | 为建立一种快速、灵敏、方便的猪流行性腹泻病毒(porcine epidemic diarrhea virus,PEDV)早期诊断方法,本研究针对PEDV的M基因片段设计了4条引物,对反应体系的时间、温度进行了优化,对试验的特异性和敏感性进行了评估,初步建立了逆转录环介导恒温扩增技术(RT-LAMP)。结果表明,建立的PEDV RT-LAMP方法在65℃恒温下扩增60min,可通过琼脂糖凝胶电泳或SYBR Green I染料肉眼判断结果,灵敏性较普通RT-PCR高100倍。该方法与猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)、猪轮状病毒(PoRV)、猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和猪瘟病毒(CSFV)等无交叉反应,具有良好的特异性。采用该RT-LAMP对100份临床疑似发病粪便拭子、小肠组织、初乳样本进行检测,结果较RT-PCR更灵敏。因此,本研究初步建立了可用于临床PEDV检测的RT-LAMP检测方法,为PEDV的临床快速诊断和综合防控提供了一种新的手段。
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