| 基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立 |
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| 引用本文： | 张洁,曹军军,祝明松,杨亚军,王小凤,王璐,石峰.基于绵羊肺炎支原体EF-Tu蛋白间接ELISA方法的建立[J].动物医学进展,2019,40(11). |
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| 作者姓名： | 张洁 曹军军 祝明松 杨亚军 王小凤 王璐 石峰 |
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| 作者单位： | 石河子大学生命科学学院,新疆石河子,832000;石河子大学动物科技学院,新疆石河子,832000;杭州毕肯莱博生物技术有限公司,浙江杭州,310000 |
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| 摘 要： | 为解决绵羊肺炎支原体感染的预防问题,建立一种简单、快速、成本低的诊断方法,构建绵羊肺炎支原体EF-Tu基因原核表达载体,诱导纯化重组蛋白并用Western blot分析其反应原性,以重组蛋白为诊断抗原,建立绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法,评估其特异性和灵敏性。结果表明,构建的重组蛋白纯化后,经Western blot证实具有良好的反应原性;间接ELISA反应条件优化显示,抗原稀释度为0.25μg/mL,一抗最佳稀释浓度为1∶50,最佳孵育时间为90 min,封闭液为50 g/L脱脂奶粉,二抗最佳稀释倍数为1∶8 000,最佳孵育时间为60 min,特异性与灵敏性良好;该方法与间接血凝法对100份血清进行检测,两者符合率为88.7%。说明试验建立的绵羊肺炎支原体间接ELISA检测方法可以推广使用。
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| 关 键 词： | 绵羊肺炎支原体 原核表达 EF-Tu蛋白 Western blot 间接ELISA |
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