| 小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定 |
| |
| 引用本文： | 陈风雷,胡佳慧,戴安娜,刘婉洋,屈玉杏,许显玉.小鼠ERO1α基因慢病毒干扰载体的构建与鉴定[J].动物医学进展,2019,40(11). |
| |
| 作者姓名： | 陈风雷 胡佳慧 戴安娜 刘婉洋 屈玉杏 许显玉 |
| |
| 作者单位： | 扬州大学兽医学院,江苏扬州 225009江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心,江苏扬州 225009 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金;中国博士后科学基金;江苏省自然科学基金;江苏省高等学校自然科学研究项目;江苏高校优势学科建设工程项目 |
| |
| 摘 要： | 针对小鼠ERO1α基因构建短发卡RNA(Short hairpin RNA,shRNA)慢病毒载体。根据NCBI中小鼠ERO1α基因序列,设计3条针对ERO1α的shRNA序列和1条阴性对照shRNA序列。将shRNA序列连接到慢病毒载体pCD513B-U6上,同时进行PCR鉴定及测序,分别命名为pCD513B-ERO1α-shRNA和pCD513B-NC-shRNA。将构建好的重组质粒和包装辅助质粒共转染HEK 293T细胞,包装产生慢病毒。将所得病毒悬液进行浓缩,同时梯度稀释转导HEK 293T细胞,检测病毒滴度。浓缩后的慢病毒转导RAW 264.7细胞,通过RT-qPCR和Western blot技术进行有效片段的筛选。之后,将筛选的慢病毒转到多种细胞系或者原代细胞,用RT-qPCR和Western blot技术检测ERO1α基因的表达情况。PCR及测序结果表明,重组慢病毒干扰载体pCD513B-ERO1α-shRNA构建成功,所包装的慢病毒其病毒滴度为5×10~7 TU/mL～10×10~7 TU/mL。RT-qPCR和Western blot结果表明,pCD513B-ERO1α-shRNA-3抑制ERO1α表达的效果最好,干扰效率在80%左右。pCD513B-ERO1α-shRNA-3能够转导多种细胞,并显著抑制ERO1α的表达,干扰效率在70%～90%。成功构建针对小鼠ERO1α基因的shRNA重组慢病毒载体,为进一步研究ERO1α功能奠定了技术基础。
|
| 关 键 词： | 内质网氧化还原酶1α 慢病毒载体 shRNA |
| 本文献已被 CNKI 万方数据 等数据库收录！ |
|
