| RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析 |
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| 引用本文： | 乔连江,陈晨,张如,崔立恒,徐丽,杨艳玲.RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因真核表达载体构建及生物信息学分析[J].中国畜牧兽医,2021,48(7):2313-2323. |
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| 作者姓名： | 乔连江 陈晨 张如 崔立恒 徐丽 杨艳玲 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院特产研究所, 农业部经济动物疫病重点实验室, 长春 130000 |
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| 基金项目： | 吉林省科技厅重点研发计划（20200402054NC）；"十三五"国家重大科研专项（2016YFD0500900） |
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| 摘 要： | 为深入研究Ras同源基因家族成员A（Ras homolog gene family，member A，Rhoa）和环氧合酶2（cyclooxygenase 2，Ptgs2）分子在布鲁菌逃逸机体免疫中发挥的作用，试验对RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因进行扩增与克隆，构建真核表达载体并预测生物信息学功能。根据GenBank数据库中公布的RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因CDS区序列（登录号：JN971019.1和NM_011198）设计引物，提取RAW264.7细胞总RNA并反转录为cDNA，经RT-PCR扩增Rhoa和Ptgs2片段并测序，将纯化的Rhoa和Ptgs2片段分别与线性化pcDNA3.1质粒相连接，对重组质粒进行测序分析和双酶切鉴定后，利用LipofectamineTM 2000转染293T细胞，经实时荧光定量PCR和Western blotting验证Rhoa和Ptgs2基因的表达情况，并应用生物信息学软件对Rhoa和Ptgs2基因进行预测分析。结果显示，试验成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达质粒；实时荧光定量PCR检测均在转录水平上表达；Western blotting可见Ptgs2蛋白在70 ku处有一明显条带，而Rhoa蛋白未出现条带。生物信息学预测显示，Rhoa和Ptgs2基因核苷酸序列相似性较高，在不同物种之间较为保守；Rhoa不具有信号肽，为不稳定蛋白，而Ptgs2在第17-18位氨基酸处存在信号肽，为稳定蛋白；Rhoa和Ptgs2蛋白分别有12和53个潜在的磷酸化位点；二级结构、三级结构均以无规则卷曲为主。本研究成功构建了RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因的真核表达载体，均在转录水平上表达，并分析了其生物学功能，为后续开展RAW264.7细胞Rhoa和Ptgs2基因在布鲁菌免疫机制方面的研究提供了工具。
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| 关 键 词： | RAW264.7细胞 Rhoa基因 Ptgs2基因 真核表达载体 生物信息学 |
| 收稿时间： | 2020-11-05 |
Construction of Eukaryotic Expression Vectors and Bioinformatics Analysis of Rhoa and Ptgs2 Genes in RAW264.7 Cells |
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| QIAO Lianjiang,CHEN Chen,ZHANG Ru,CUI Liheng,XU Li,YANG Yanling.Construction of Eukaryotic Expression Vectors and Bioinformatics Analysis of Rhoa and Ptgs2 Genes in RAW264.7 Cells[J].China Animal Husbandry & Veterinary Medicine,2021,48(7):2313-2323. |
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| Authors: | QIAO Lianjiang CHEN Chen ZHANG Ru CUI Liheng XU Li YANG Yanling |
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| Institution: | Key Laboratory of Special Animal Epidemic Disease, Ministry of Agricultural, Institute of Special Economic Animal and Plant Sciences, Chinese Academy of Agricultural Sciences(CAAS), Changchun 130000, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | RAW264 7 cells Rhoa gene Ptgs2 gene eukaryotic expression vector bioinformatics |
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