| 玻璃化冷冻对猪MⅡ期卵母细胞及其DNA的影响 |
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| 引用本文： | 薛梦琦,周悦,刘可可,王欣雨,董胤余,唐小川,王晓丽.玻璃化冷冻对猪MⅡ期卵母细胞及其DNA的影响[J].中国畜牧兽医,2021,48(7):2475-2483. |
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| 作者姓名： | 薛梦琦 周悦 刘可可 王欣雨 董胤余 唐小川 王晓丽 |
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| 作者单位： | 广西大学动物科学技术学院, 南宁 530005 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目（31460644）；广西自然科学基金项目（2016GXNSFAA380039、2018GXNSFAA281020） |
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| 摘 要： | 研究旨在筛选最适合猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻的冷冻液，并探究玻璃化冷冻对猪MⅡ期卵母细胞DNA的影响。选取目前应用最多的7种冷冻液（分别为1、2、3、4、5、6、7组），将MⅡ期卵母细胞随机分为8组，其中对照组直接进行孤雌激活，其余7组分别进行7种冷冻液处理后不经液氮冷冻直接于解冻液中解冻，解冻后进行孤雌激活，通过卵裂率、囊胚率和囊胚细胞数的统计结果筛选出最适冷冻液；应用筛选的3种冷冻液，进行猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻，解冻后恢复2 h，统计卵母细胞形态正常率，孤雌激活44~48 h统计卵裂率；应用透射电子显微镜观察正常MⅡ期卵母细胞与玻璃化冷冻-复苏后的MⅡ期卵母细胞超微结构的变化；将猪MⅡ期卵母细胞随机分成对照组、冷冻液处理组和冷冻组，应用彗星电泳技术检测玻璃化冷冻对卵母细胞DNA的损伤。结果发现，与对照组相比，除5组卵裂率、1组囊胚率显著降低（P<0.05）外，其余各组卵裂率、囊胚率均差异不显著（P>0.05）；各组间囊胚细胞数均低于对照组，但差异均不显著（P>0.05），3、6、7组卵裂率和囊胚率较高；玻璃化冷冻-解冻后，7组卵母细胞的形态正常率、卵裂率均显著低于3、6组（P<0.05），6组卵裂率高于3组；MⅡ期卵母细胞移入预处理液中后可见明显的皱缩，移入冷冻液中迅速脱水，解冻后可见卵母细胞透明带断裂，胞质皱缩、分布不均；透射电子显微镜下，冷冻后猪MⅡ期卵母细胞透明带及细胞膜损伤，微绒毛严重损伤甚至消失，皮质颗粒排列在质膜下且数量减少，脂滴形态破坏、形成空泡，内质网与脂滴的联系损坏，线粒体肿胀、嵴不明显；彗星电泳发现，与对照组相比，冷冻液处理组头部DNA、尾部DNA和Olive尾矩值均差异不显著（P>0.05），有彗星拖尾现象；冷冻组头部DNA损伤、尾部DNA损伤与Olive尾矩值均显著高于冷冻液处理组和对照组（P<0.05），有明显彗星拖尾现象。结果表明，以二甲基亚砜（DMSO）和乙二醇（EG）为主要成分的冷冻液适于猪MⅡ期卵母细胞玻璃化冷冻；玻璃化冷冻对猪MⅡ期卵母细胞超微结构及其DNA存在一定损伤作用，其损伤机制有待进一步研究。
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| 关 键 词： | DNA损伤 冷冻液 玻璃化冷冻 卵母细胞 |
| 收稿时间： | 2020-10-29 |
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