| 鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V基因的重组表达及酶特性 |
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| 引用本文： | 孙亚伟,胡功政,陈红英,邓立新,刘建华,潘玉善,许兰菊,李胜利.鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V基因的重组表达及酶特性[J].中国兽医学报,2009,29(5). |
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| 作者姓名： | 孙亚伟 胡功政 陈红英 邓立新 刘建华 潘玉善 许兰菊 李胜利 |
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| 作者单位： | 河南农业大学,牧医工程学院,河南,郑州,450002 |
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| 摘 要： | 通过PCR扩增获得鸡福氏志贺菌产超广谱β-内酰胺酶SHV-12和TEM-1V型ESBLs基因片段,定向克隆入质粒载体构建重组质粒,酶切和DNA测序鉴定后转化受体菌BL21,用SDS-PAGE电泳观察目的基因在重组菌中的表达,用双紫外分光光度仪测定表达蛋白的底物水解特性和抑制剂的抑酶作用.结果表明,构建的重组质粒经EcoRⅠ和XholⅠ双酶切后,可切下目的条带;DNA测序发现插入片段与SHV-12和TEM-1V ESBLs基因序列完全一致.重组质柱转化BL21所表达的重组蛋白有超广谱β-内酰胺酶活性.重组菌S-BL21、T-BL21的最优表迭条件分别是IPTG浓度0.5、0.8 mmol/L,诱导温度37℃、37℃,诱导时间5、4 h.SHV-12和TEM-1V型ESBLs能水解青霉素G、氨苄西林、阿莫西林、头孢噻呋、头孢曲松和头孢噻肟;对头孢噻呋钠的Km值最小,分别为4.9和1.29;对头孢曲松钠的Km值最大,分别为53.43和24.13;抑制剂舒巴坦钠、它唑巴坦钠对SHV-12和TEM-1V型ESBLs水解抗生素有不同程度的抑制作用.
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| 关 键 词： | 鸡福氏志贺菌 超广谱β-内酰胺酶 |
Cloning and expression of SHV-12 and TEM-1V type extended-spectrum β-lactamase genes produced by chicken shigella and their related characteristics |
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| SUN Ya-wei,HU Gong-zheng,CHEN Hong-ying,DENG Li-xin,LIU Jian-hua,PAN Yu-shan,XU Lan-ju,LI Sheng-li.Cloning and expression of SHV-12 and TEM-1V type extended-spectrum β-lactamase genes produced by chicken shigella and their related characteristics[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2009,29(5). |
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| Authors: | SUN Ya-wei HU Gong-zheng CHEN Hong-ying DENG Li-xin LIU Jian-hua PAN Yu-shan XU Lan-ju LI Sheng-li |
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| Keywords: | SHV-12 TEM-1V |
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