| 4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用 |
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| 引用本文： | 高 睿,徐 伟,罗 艳,等.4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法的建立及应用[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2023,51(10):20-28. |
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| 作者姓名： | 高 睿 徐 伟 罗 艳 等 |
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| 作者单位： | 杨凌职业技术学院 动物工程分院/动物疫病防控陕西省高校工程研究中心;陕西省彬州市动物疫控中心 |
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| 基金项目： | 陕西省重点研发计划一般项目（2022NY-098） |
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| 摘 要： | 【目的】建立牛病毒性腹泻病毒（BVDV）、牛冠状病毒（BCoV）、牛轮状病毒（BRV）、牛恶性卡他热病毒（MCFV）4种致牛腹泻病毒多重荧光定量PCR检测方法，为BVDV、BCoV、BRV和MCFV的鉴别诊断提供技术支持。【方法】根据BVDV的5′UTR基因、BCoV的N基因、BRV的VP6基因和MCFV的ORF9基因的保守区域设计引物，克隆目的基因构建标准阳性重组质粒，建立可同时检测4种致牛腹泻病毒的多重荧光定量PCR检测方法，并对该方法的特异性、敏感性和重复性进行评价。用建立的多重荧光定量PCR检测方法对76份临床样品进行检测，并与常规PCR检测方法的结果进行比较。【结果】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法，该方法建立的标准曲线线性关系良好，仅可特异性扩增出4种目标基因片段；对BVDV、MCFV、BRV和BCoV的最低检出限分别为9.4×101，1.4×103，9.1×101和1.2×102拷贝/μL，与普通PCR相比，灵敏性高出10～1 000倍；批内、批间差异均小于5%。76份临床样品检测结果显示，多重荧光定量PCR检测结果与普通PCR检测结果的符合率分别为98.7%（BCoV）、97.4%（BRV）、100.0%（BVDV）和100.0%（MCFV）。【结论】建立了BVDV、BCoV、BRV和MCFV多重荧光定量PCR检测方法，该方法特异性强、灵敏度高、重复性好，可用于牛腹泻病毒病原的实验室检测。
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| 关 键 词： | 牛腹泻病 牛病毒性腹泻病毒 牛冠状病毒 牛恶性卡他热病毒 牛轮状病毒 多重荧光定量PCR检测 |
| 收稿时间： | 2022/6/30 0:00:00 |
Establishment and application of multiple fluorescent quantitative PCR for detection of 4 bovine diarrhea viruses |
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| GAO Rui,XU Wei,LUO Yan,et al.Establishment and application of multiple fluorescent quantitative PCR for detection of 4 bovine diarrhea viruses[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2023,51(10):20-28. |
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| Authors: | GAO Rui XU Wei LUO Yan |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | bovine diarrheal disease bovine viral diarrhea virus bovine coronavirus bovine malignant catarrhal fever virus bovine rotavirus multiple fluorescence quantification PCR |
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