| 牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析 |
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| 引用本文： | 何延华,景志忠,陈国华,房永祥,蒙学莲,李小庆,段风云,王生富.牦牛外周血单个核细胞抑制消减cDNA文库的构建及部分差异表达分子的克隆分析[J].中国预防兽医学报,2009,31(8). |
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| 作者姓名： | 何延华 景志忠 陈国华 房永祥 蒙学莲 李小庆 段风云 王生富 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院兰州兽医研究所,家畜疫病病原生物学国家重点实验室/甘肃省动物寄生虫病重点实验室,甘肃,兰州,730046 |
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| 基金项目： | 国家863项目，甘肃自然基金 |
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| 摘 要： | 为筛选牦牛外周血单核细胞(PBMC)差异性基因,以刀豆素A(ConA)和脂多糖(LPS)联合刺激的PBMC cDNA为实验组,未经诱导刺激的PBMC cDNA为驱动组,利用抑制性消减杂交技术(SSH)构建了丝裂原诱导刺激PBMC的消减文库并对其部分阳性克隆进行了EST序列分析.从消减文库中随机挑取16个阳性克隆,进行PCR鉴定,显示克隆的重组率大于93%,插入片段大小大部分集中在200 bp～1 000 bp之间.随机挑取100个克隆进行测序及同源性分析,初步获得27条差异表达基因片段,其中24个为已知基因,3个为新ESTs序列;随机选择非重复的6个差异表达的序列设计引物,以半定量PCR方法验证其消减效率.结果显示,均从构建的消减文库中扩增到目的片段,其中5个为诱导性差异表达分子,1个为诱导特异性表达分子,说明该文库有较高的质量.本研究应用抑制消减杂交技术构建了牦牛PBMC的差异表达cDNA文库,并高通量克隆鉴定了相关功能基因片段,表明该技术手段有助于快速发现牦牛新功能基因.
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| 关 键 词： | 外周血单个核细胞(PBMC) 诱导刺激 抑制消减杂交 cDNA文库 |
Construction of cDNA SSH libraries for grunniens peripheral blood mononuclear cell |
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| HE Yan-hua,JING Zhi-zhong,CHEN Guo-hua,FANG Yong-xiang,MENG Xue-lian,LI Xiao-qing,DUAN Feng-yun,WANG Sheng-fu.Construction of cDNA SSH libraries for grunniens peripheral blood mononuclear cell[J].Chinese Journal of Preventive Veterinary Medicine,2009,31(8). |
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| Authors: | HE Yan-hua JING Zhi-zhong CHEN Guo-hua FANG Yong-xiang MENG Xue-lian LI Xiao-qing DUAN Feng-yun WANG Sheng-fu |
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