| 奶牛瘤胃微生物元基因组文库中二肽基肽酶Ⅳ的筛选与分析 |
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| 引用本文： | 赵静雯,王加启,赵圣国,孙鹏,卜登攀,胡小丽,卢玉飞,王丹丹,金迪.奶牛瘤胃微生物元基因组文库中二肽基肽酶Ⅳ的筛选与分析[J].中国农业科学,2013,46(8):1687-1693. |
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| 作者姓名： | 赵静雯 王加启 赵圣国 孙鹏 卜登攀 胡小丽 卢玉飞 王丹丹 金迪 |
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| 作者单位： | 1.中国农业科学院北京畜牧兽医研究所/动物营养学国家重点实验室，北京 100193
2.内蒙古民族大学动物科技学院，内蒙古通辽 028000 |
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| 基金项目： | 国家“973”计划项目（2011CB100804） |
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| 摘 要： | 【目的】研究奶牛瘤胃内参与蛋白质降解过程中二肽基肽酶Ⅳ（dipeptidyl peptidases Ⅳ，DPP-Ⅳ）的序列特征和酶学性质。【方法】从奶牛瘤胃微生物Fosmid文库中挑选17 664个克隆，利用dpp-Ⅳ简并引物筛选含dpp-Ⅳ的阳性克隆。提取阳性克隆的质粒，用限制性内切酶Hind Ⅲ进行酶切。PCR扩增含dpp-Ⅳ目的片段，并克隆测序。对阳性克隆的Fosmid末端进行测序。提取阳性克隆粗酶液，利用底物Gly-Pro-pNA检测肽酶活性。【结果】筛选后获得10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆（命名为DP1—DP10）。Fosmid末端序列经BLASTX比对后发现78%的序列可以与数据库的已知序列相匹配，但相似度变化较大（44%—94%）。DPP-Ⅳ序列经BioEdit比对后，发现均含有N端保守区域（DWVYEEE）和C端催化区域（GWSYGG），经BLASTP比对发现阳性克隆的DPP-Ⅳ分别与Cyclobacterium marinum（43%）、Capnocytophaga sp.（63%）、Prevotella ruminicola 23（66%）和Solitalea canadensis（50%）的DPP-Ⅳ相似度高。酶活力检测发现DP7肽酶活力最高，为6.88 U?mg-1。【结论】从瘤胃微生物Fosmid文库中获得了10个含有dpp-Ⅳ的阳性克隆，它们具有不同的dpp-Ⅳ序列特征和肽酶活性。
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| 关 键 词： | 瘤胃微生物 Fosmid文库 二肽基肽酶Ⅳ 末端序列 酶活性 |
| 收稿时间： | 2012-08-22 |
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