| 猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达 |
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| 引用本文： | 展小过,乔传玲,陈艳,杨焕良,孔维,吴运谱,辛晓光,陈化兰.猪流感病毒NP基因重组复制缺陷型腺病毒的构建与表达[J].中国兽医学报,2010,30(7). |
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| 作者姓名： | 展小过 乔传玲 陈艳 杨焕良 孔维 吴运谱 辛晓光 陈化兰 |
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| 作者单位： | 中国农业科学院,哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室,农业部动物流感重点开放实验室,黑龙江,哈尔滨,150001 |
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| 基金项目： | 国家科技攻关计划资助项目，国家重点实验室科研业务费资助项目 |
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| 摘 要： | 以含有猪流感病毒A/Swine/Guangdong/9/2005(H3N2)NP基因的重组质粒pMD18-NP为模板,利用带特定酶切位点的引物PCR扩增NP基因,将其亚克隆至质粒pIRES2-EGFP中,再次将含有NP及EGFP的基因片段克隆到腺病毒的穿梭质粒pDC315,构建重组穿梭质粒pDC315-NP-EGFP。利用脂质体转染法将穿梭质粒pDC315-NP-EGFP和腺病毒骨架质粒pBHGloxΔE1,E3Cre共转染HEK293细胞,基于腺病毒感染后形成的典型细胞病变及EGFP基因在细胞中的表达筛选到重组腺病毒rAd-NP-EGFP。经PCR和Western blotting鉴定,结果表明NP基因已被重组到腺病毒的基因组中,并能够伴随病毒的复制而表达,表达蛋白具有良好的生物学活性。重组腺病毒rAd-NP-EGFP经增殖、纯化后其TCID50可达1.26×1010/mL,为进一步研究该重组病毒的免疫原性奠定了基础。
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| 关 键 词： | 猪流感病毒 NP基因 重组腺病毒 |
Construction of a replication-defective recombinant adenovirus expressing NP gene of swine influenza virus |
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| ZHAN Xiao-guo,QIAO Chuan-ling,CHEN Yan,YANG Huan-liang,KONG Wei,WU Yun-pu,XIN Xiao-guang,CHEN Hua-lan.Construction of a replication-defective recombinant adenovirus expressing NP gene of swine influenza virus[J].Chinese Journal of Veterinary Science,2010,30(7). |
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| Authors: | ZHAN Xiao-guo QIAO Chuan-ling CHEN Yan YANG Huan-liang KONG Wei WU Yun-pu XIN Xiao-guang CHEN Hua-lan |
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