| 靶向敲除猪ApoE基因的CRISPR/Cas9系统构建及基因组检测 |
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| 引用本文： | 雒志新,闫强,代冬梅,张智英,王昕.靶向敲除猪ApoE基因的CRISPR/Cas9系统构建及基因组检测[J].家畜生态学报,2018,39(5):11-17. |
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| 作者姓名： | 雒志新 闫强 代冬梅 张智英 王昕 |
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| 作者单位： | 西北农林科技大学动物科技学院 |
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| 摘 要： | 通过敲除猪的ApoE基因,为后期构建ApoE缺陷型动物模型奠定基础。利用CRISPR/Cas9系统和实验室前期构建的报告载体,分别构建了靶向猪ApoE基因的两个CRISPR/Cas9表达载体和相应的报告载体。通过CRISPR/Cas9表达载体和RG(Red-GFP)报告载体转染HEK 293T细胞荧光观察结果显示,构建的CRISPR/Cas9表达载体均有较高的活性,进一步在流式细胞仪上检测其活性分别为6.50%和6.83%。将CRISPR/Cas9表达载体和RPG(Red-PuroR-GFP)报告载体转染PK15细胞系,经过嘌呤霉素药物筛选后,对富集到的细胞进行基因组检测。结果显示本系统能够对猪PK15细胞中的ApoE基因进行有效的敲除,其敲除效率分别为40%、53.3%。试验结果可为ApoE敲除猪动物模型的构建提供理论依据。
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Construction of CRISPR/Cas9 System Targeting#br#
Porcine ApoE Gene and Detection in Genome |
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