| RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动的长双链RNA干扰载体的构建与验证 |
| |
| 引用本文： | 曹柯,孙朕,黄培华,樊宝良.RNA聚合酶Ⅱ启动子驱动的长双链RNA干扰载体的构建与验证[J].黑龙江畜牧兽医,2013(15):1-5,190. |
| |
| 作者姓名： | 曹柯 孙朕 黄培华 樊宝良 |
| |
| 作者单位： | 河北农业大学动物科技学院;河北工程大学教育技术中心;河北工程大学农学院 |
| |
| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(30972081);国家重大专(2011ZX08006-004);“863”国家高技术研究发展计划项目(2007AA100504) |
| |
| 摘 要： | 为了探索构建由RNA聚合酶Ⅱ型启动子驱动、能有效避免干扰素反应的表达长双链RNA的RNA干扰载体,试验在转录单元两端各添加了一个自剪切核酶序列,在转录后切成RNA出核所必要的5’帽子和3’polyA尾,以绿色荧光蛋白(EGFP)基因为报告基因插入2个核酶之间作为试验载体,以表达红色荧光蛋白基因的载体作转染效率校准,通过瞬间转染对荧光蛋白的表达情况进行观察和RT-PCR分析。结果表明:在转染效率基本一致的情况下,试验组未观察到绿色荧光;2个核酶能够完全自剪切,试验组细胞质中有EGFP mRNA的存在,但与正常对照组相比下降了46.1%。说明研究设计的载体达到了延迟表达RNA出核的目的,为用该载体表达长双链RNA时在其出核之前被Dicer酶有效切割成小双链RNA从而避免其出核引起干扰素反应提供了时间保障。
|
| 关 键 词： | RNA干扰 RNA聚合酶Ⅱ启动子 长双链RNA 核酶 |
| 本文献已被 CNKI 等数据库收录！ |
|
