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猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选
引用本文:廖亚金,李素,贺番,何文瑞,董泓,冯烁,孙元,仇华吉.猪外周血单个核细胞cDNA酵母表达文库的构建及与猪瘟病毒E2蛋白相互作用细胞蛋白的筛选[J].中国预防兽医学报,2013,35(9).
作者姓名:廖亚金  李素  贺番  何文瑞  董泓  冯烁  孙元  仇华吉
作者单位:中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/猪传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001
基金项目:中国农业科学院基本科研业务费预算增量项目
摘    要:为研究猪瘟病-毒(CSFV)蛋白与宿主细胞蛋白之间的相互作用,本研究通过SMART技术合成猪外周血单个核细胞(PBMC)双链cDNA,以携带与载体pGADT7-Rec重组位点同源序列的特异引物经long-distance PCR扩增双链cDNA.纯化双链cDNA并与载体pGADT7-Rec共转化酵母菌株Y187,经同源重组构建PBMC cDNA酵母表达文库.以CSFV E2蛋白为诱饵进行酵母双杂交筛选,得到阳性克隆根据序列比对分析结果,进一步进行共转化验证.结果显示筛选到17个与CSFV E2蛋白相互作用的宿主细胞蛋白,基因注释(GO)分析表明这些蛋白分别参与免疫、代谢、细胞生长与增殖、生物调节等过程,为研究它们与CSFV E2的相互作用奠定了基础.

关 键 词:猪瘟病毒  PBMC  cDNA文库  酵母双杂交  E2蛋白

Construction of a yeast expression library of PBMC and screen of classical swine fever virus E2-interacting proteins
Abstract:
Keywords:classical swine fever virus  PBMC  cDNA library  yeast two-hybrid assay  E2 protein
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