| 鸭FST基因编码区克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达 |
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| 引用本文： | 刘贺贺,金海波,王继文,曹伟,韩春春,李亮,许峰.鸭FST基因编码区克隆、序列分析及其在大肠杆菌中的表达[J].畜牧兽医学报,2011,42(2). |
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| 作者姓名： | 刘贺贺 金海波 王继文 曹伟 韩春春 李亮 许峰 |
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| 作者单位： | 四川农业大学,畜禽品种资源发掘与利用重点实验室,雅安,625014 |
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| 基金项目： | “十一五”国家科技支撑计划重点项目(2008BADB2B08); 四川省科技厅应用基础项目(2008JY0099); 四川省教育厅重点项目(07ZA056) |
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| 摘 要： | 本研究旨在获取鸭卵泡抑素(FST)外源蛋白以及进一步深入了解其在肌肉发育和繁殖上的作用,采用RT-PCR方法从鸭卵巢中克隆鸭FST基因CDS序列,并将编码FST成熟蛋白的核酸片段连入原核表达载体pET-32a(+)中,转化大肠杆菌(Escherichiacoli)并采用IPTG进行诱导,诱导后的蛋白经SDS-PAGE分析后用蛋白免疫技术鉴定。序列分析表明,FST基因编码区序列为1 032 bp,编码343个氨基酸,其中信号肽由28个氨基酸组成,成熟蛋白具有4个保守结构域:N-domain、DomainⅠ、DomainⅡ和DomainⅢ,其中DomainⅠ与鼠DomainⅠ结构较相似,DomainⅡ和DomainⅢ差异很大。SDS-PAGE电泳结果显示表达出的融合蛋白为52 ku,免疫鉴定结果呈阳性。结果表明,FST基因在3个功能结构域上存在差异,推测DomainⅠ主要与其肌肉发育有关,而DomainⅡ、DomainⅢ与鸭繁殖关系密切。本研究成功获取了鸭卵泡抑素蛋白,为进一步研究卵泡抑素在鸭肌肉发育以及繁殖中的功能奠定了基础。
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| 关 键 词： | 鸭卵泡抑素 CDS 分子克隆 原核表达 |
Molecular Cloning and Analysis of Duck Follistatin Gene CDS and Its Expression in Escherichia coli |
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| LIU He-he,JIN Hai-bo,WANG Ji-wen,CAO Wei,HAN Chun-chun,LI Liang,XU Feng.Molecular Cloning and Analysis of Duck Follistatin Gene CDS and Its Expression in Escherichia coli[J].Acta Veterinaria et Zootechnica Sinica,2011,42(2). |
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| Authors: | LIU He-he JIN Hai-bo WANG Ji-wen CAO Wei HAN Chun-chun LI Liang XU Feng |
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| Abstract: | In order to gain the duck FST exogenous protein and to elucidate about its role in muscle development and reproduction,the total RNA was extracted from adult female duck and the FST coding domain sequence was cloned using RT-PCR method.The duck FST mature peptide cDNA was inserted into pET-32a(+) vector,and transformed into Escherichia coli Rosetta,and then it was induced by IPTG,after that,the recombinant expression products were detected by SDS-PAGE and confirmed by Western blotting analysis.The results o... |
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| Keywords: | duck follistatin CDS molecular cloning prokaryotic expression |
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