| 溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的原核表达及多克隆抗体制备 |
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| 引用本文： | 陈春琳,刘 祥,俱 雄.溶藻弧菌外膜蛋白OmpK的原核表达及多克隆抗体制备[J].西北农林科技大学学报(社会科学版),2015,43(7):7-14. |
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| 作者姓名： | 陈春琳 刘 祥 俱 雄 |
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| 作者单位： | 陕西理工学院 生物科学与工程学院,陕西理工学院 生物科学与工程学院,陕西理工学院 生物科学与工程学院 |
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| 基金项目： | 陕西省教育厅科学研究计划项目(2013JK0723)；陕西理工学院人才启动项目(SLGQD13-15) |
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| 摘 要： | 【目的】构建溶藻弧菌外膜蛋白OmpK原核表达载体,优化OmpK蛋白的诱导表达条件,制备OmpK蛋白小鼠多克隆抗体。【方法】通过PCR扩增获得ompK基因,连接pET-32a质粒构建OmpK-pET32a载体,将其转化大肠杆菌BL21后进行诱导表达。利用切胶纯化获得OmpK蛋白后,免疫小鼠制备OmpK蛋白多克隆抗体,采用ELISA法检测抗体效价,Western-Blotting法检测抗血清特异性。通过正交试验,获得OmpK菌株的最佳诱导表达条件与培养条件。【结果】PCR扩增获得了长816bp的ompK基因;成功构建了OmpK-pET32a载体,其诱导表达产物分子质量为30ku,与预期结果一致。ELISA法获得OmpK抗血清效价达1∶1 600,Western-Blotting试验证实抗血清具有很好的特异性。OmpK菌株最佳诱导表达条件为:菌液OD600值0.8,IPTG终浓度0.3mmol/L,诱导时间8h,诱导温度32℃;最佳培养条件为:不添加葡萄糖,转速230r/min,装液量50mL。【结论】成功制备了OmpK蛋白多克隆抗体,确定了OmpK蛋白菌株的最佳诱导表达条件与培养条件。
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| 关 键 词： | 溶藻弧菌 OmpK蛋白 原核表达 多克隆抗体 |
| 收稿时间： | 2014/6/26 0:00:00 |
Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of outer membrane protein OmpK in Vibrio alginolyticus |
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| CHEN Chun-lin,LIU Xiang and JU Xiong.Prokaryotic expression and polyclonal antibody preparation of outer membrane protein OmpK in Vibrio alginolyticus[J].Journal of Northwest Sci-Tech Univ of Agr and,2015,43(7):7-14. |
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| Authors: | CHEN Chun-lin LIU Xiang and JU Xiong |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Vibrio alginolyticus OmpK protein prokaryotic expression polyclonal antibody |
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