| 一种基于ITR序列的羊痘病毒TaqMan探针荧光PCR检测方法的建立 |
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| 引用本文： | 王建华,李宁,赵祥平,贺艳,郑文杰,刘伟.一种基于ITR序列的羊痘病毒TaqMan探针荧光PCR检测方法的建立[J].黑龙江畜牧兽医,2018(3). |
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| 作者姓名： | 王建华 李宁 赵祥平 贺艳 郑文杰 刘伟 |
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| 作者单位： | 天津出入境检验检疫局动植物与食品检测中心;中国兽药监察所; |
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| 摘 要： | 为了建立一种快速检测羊痘病毒的方法,试验根据羊痘病毒绵羊痘病毒(SPPV)和山羊痘病毒(GTPV)]末端反向重复(ITR)序列的保守区设计了1对特异引物和TaqMan探针,通过优化反应体系建立了一种检测羊痘病毒的TaqMan探针荧光PCR检测方法。结果表明:该方法对羊痘病毒具有良好的特异性,不与猪痘病毒(SWPV)、鸡痘病毒(FPV)、羊传染性脓疱皮炎病毒(ORFV)及口蹄疫病毒(FMDV)发生交叉反应。该方法对质粒标准对照(PCR~2.1-GPTV-ITR)的最适线性检测范围为2.3×10~1~2.3×10~8拷贝/μL,标准曲线方程为Y=-3.416 2X+38.605,相关系数(R~2)为0.999 9,检测下限为23拷贝数。对3个不同浓度的PCR~2.1-GPTV-ITR进行组内试验和组间试验检测,每个浓度的重复试验Ct值的变异系数均小于1.5%,具有良好的重现性。用该方法对来自安徽、广西和天津地区的36份临床样本进行羊痘病毒检测,其中18份样本羊痘病毒核酸检测为阳性。说明本方法可用于羊痘病毒快速、准确检测。
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