| 鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建 |
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| 引用本文： | 夏明,王冬雪,李月红,康元环,贾俊鹏,王伟利,钱爱东,孟庆峰,单晓枫.鲤春病毒G蛋白基因实时荧光定量RT-PCR标准曲线的构建[J].黑龙江畜牧兽医,2018(19). |
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| 作者姓名： | 夏明 王冬雪 李月红 康元环 贾俊鹏 王伟利 钱爱东 孟庆峰 单晓枫 |
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| 作者单位： | 吉林农业大学动物科学技术学院;吉林出入境检验检疫局检验检疫技术中心 |
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| 摘 要： | 为了更加精确地对鲤春病毒(Spring viremia of carp virus,SVCV)进行定量检测,试验以Taq Man探针法为基础,提取鲤春病毒总RNA,反转录为cDNA后进行PCR扩增,得到目的条带并回收,将目的片段与pMD18-T载体连接导入大肠杆菌DH5α感受态细胞中,提取质粒并进行实时荧光定量RT-PCR测定,利用反应得到的Ct值与各浓度梯度质粒模板拷贝数的对数值绘制标准曲线。结果表明:以鲤春病毒cDNA为模板进行PCR扩增,获得清晰的目的条带,与预期相同;对鲤春病毒G蛋白重组质粒进行实时荧光定量RT-PCR扩增,所得扩增曲线有较好的重复性,各浓度梯度扩增曲线有明显的规律性,低浓度质粒模板扩增明显;获得的标准曲线有明显的线性关系,曲线回归系数为0.992。说明实时荧光定量RT-PCR方法敏感性较高、稳定性好、可靠精确,可以作为鲤春病毒检测的定量方法。
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