| 牛支原体p30蛋白的原核表达与鉴定 |
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| 引用本文： | 李俊萱,吴胜昔,梁望旺,李令臣,鲁友铭,侯利嘉,李志,曾政,黄恒,张运群.牛支原体p30蛋白的原核表达与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医,2018(20). |
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| 作者姓名： | 李俊萱 吴胜昔 梁望旺 李令臣 鲁友铭 侯利嘉 李志 曾政 黄恒 张运群 |
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| 作者单位： | 重庆理工大学药学与生物工程学院;重庆市动物疫病预防控制中心 |
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| 摘 要： | 为了实现牛支原体p30蛋白在大肠杆菌中的高效表达,试验根据GenBank发表的p30(登录号为AIA33998.1)基因序列,在不改变p30蛋白氨基酸序列的情况下优化基因序列,全基因合成p30基因,并将其克隆到pET28a(+)载体中,构建的重组质粒pET28a(+)-p30转化至BL21(DE3)工程菌中进行诱导表达,筛选重组菌pET28a(+)-p30/BL21(DE3)诱导表达的最适诱导温度、诱导时间及IPTG诱导浓度,利用His-tag镍柱纯化p30重组蛋白,并对纯化后的重组蛋白进行鉴定。结果表明:当重组菌株pET28a(+)-p30/BL21(DE3)诱导条件为37℃、IPTG浓度为0.1 mmol/L、诱导4 h时,p30蛋白表达量最高;SDS-PAGE电泳显示经镍柱纯化后p30蛋白达到了电泳纯,经Western-blot分析,目的蛋白具有抗原特异性,在36 ku处有明显的蛋白印迹条带,与预期大小相符。说明成功实现了在大肠杆菌中高效表达牛支原体p30重组蛋白。
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