| 急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析 |
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| 引用本文： | 钱 璟,王崇明,潘鲁青,黄 倢.急性病毒性坏死病毒引物酶表达及酶学活性分析[J].水产学报,2013,37(9):1401-1408. |
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| 作者姓名： | 钱 璟 王崇明 潘鲁青 黄 倢 |
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| 作者单位： | 中国海洋大学水产学院,海水养殖教育部重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所;中国海洋大学水产学院,海水养殖教育部重点实验室;中国水产科学研究院黄海水产研究所 |
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| 基金项目： | 现代农业产业技术体系建设专项(CARS-48) |
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| 摘 要： | 根据急性病毒性坏死病毒(acute viral necrosis virus,AVNV)ORF 024序列设计引物,以AVNV的DNA为模板进行扩增AVNV引物酶(primase)基因,同时构建表达质粒pET32a-prim,并转化至E.coli BL21(DE3)进行诱导表达。SDS-PAGE检测显示诱导表达两条蛋白条带,其中分子量为60 ku的蛋白条带与预期表达蛋白条带大小一致,另一蛋白条带分子量约为55 ku,经Western-blotting及质谱分析鉴定分子量60 ku的蛋白条带为AVNV-引物酶,而表达出的55 ku蛋白条带存在部分引物酶多肽片段。RNA结合荧光染料Pico-Green在30 min内荧光强度比较稳定,从而确定30 min为进行AVNV引物酶活性分析的最佳终止反应时间,并在引物合成实验中观察到30 min内引物酶活性较高。当使用多聚胞嘧啶寡核苷酸poly(d C)为模板时,重组引物酶能特异性催化底物GTP。0.1 mmol/L Zn2+可显著增强引物酶活性,而1mmol/L Mn2+和EDTA能抑制引物酶活性。
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| 关 键 词： | 引物酶 原核表达 Pico-Green核酸染料 酶学活性 多聚胞嘧啶寡核苷酸 |
| 收稿时间： | 2012/12/26 0:00:00 |
| 修稿时间： | 2013/4/22 0:00:00 |
Expression and enzymatic activity analysis of primase from acute viral necrosis virus |
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| QIAN Jing,WANG Chongming,PAN Luqing and HUANG Jie.Expression and enzymatic activity analysis of primase from acute viral necrosis virus[J].Journal of Fisheries of China,2013,37(9):1401-1408. |
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| Authors: | QIAN Jing WANG Chongming PAN Luqing and HUANG Jie |
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| Institution: | Jie 2(1.Key Laboratory of Mariculture,Ministry of Education,Ocean University of China,Qingdao 266003,China;2.Yellow Sea Fisheries Research Institute,Chinese Academy of Fishery Sciences,Qingdao 266071,China) |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | primase prokaryotic expression Pico-Green fluorescent dye enzymatic activity poly(d C) |
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