| 瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建 |
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| 引用本文： | 范文斌,刘永斌,李长青.瘤胃脂肪分解菌实时荧光定量PCR方法的构建[J].华北农学报,2015(1). |
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| 作者姓名： | 范文斌 刘永斌 李长青 |
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| 作者单位： | 1. 呼和浩特职业学院 生物化学工程学院,内蒙古 呼和浩特,010051
2. 内蒙古农牧业科学院,内蒙古 呼和浩特,010031 |
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| 基金项目： | 内蒙古自然科学基金项目(2012MS0417)；国家自然科学基金项目 |
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| 摘 要： | 为定量测定瘤胃脂肪分解菌,试验构建了脂肪分解菌实时荧光定量PCR的标准品及标准曲线。提取瘤胃微生物总DNA,以脂肪分解菌16S r DNA特异性引物进行PCR扩增,回收PCR产物,与PMD19-T Vector连接并转化大肠杆菌。阳性重组质粒经PCR和测序鉴定后,将提取的质粒DNA进行梯度稀释并作为模板,利用荧光定量PCR反应做出标准曲线。结果显示:PCR产物与目的基因的相似性大于99%,以不同稀释度的重组质粒为模板获得的荧光定量PCR扩增曲线差异明显,构建了相关系数接近1的标准曲线,且熔解曲线峰值单一。试验建立的实时荧光定量PCR方法可用于瘤胃脂肪分解菌的定量检测,为进一步研究该菌在反刍动物瘤胃发酵中的分子机理奠定了基础。
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| 关 键 词： | 瘤胃脂肪分解菌 实时荧光定量PCR 标准品质粒 标准曲线 |
Development of a Real-time Quantitative PCR for Anaerovibrio lipolytica in Rumen |
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| FAN Wen-bin,LIU Yong-bin,LI Chang-qing.Development of a Real-time Quantitative PCR for Anaerovibrio lipolytica in Rumen[J].Acta Agriculturae Boreali-Sinica,2015(1). |
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| Authors: | FAN Wen-bin LIU Yong-bin LI Chang-qing |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Ruminal Anaerovibrio lipolytica Real-time quantitative PCR Standard plasmid Standard curve |
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