| 基于电化学生物传感技术的鱼类IHNV病毒检测方法构建 |
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| 引用本文： | 赵紫霞,许建,张研,江炎亮,陈强.基于电化学生物传感技术的鱼类IHNV病毒检测方法构建[J].农业生物技术学报,2018(2). |
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| 作者姓名： | 赵紫霞 许建 张研 江炎亮 陈强 |
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| 作者单位： | 中国水产科学研究院农业部水生动物基因组学重点实验室/渔业生物技术北京市重点实验室;南开大学生命科学学院/生物活性材料教育部重点实验室; |
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| 摘 要： | 本研究旨在开发传染性造血器官坏死病毒(Infectious hematopoietic necrosis virus,IHNV)现场检测新技术,用于鉴定鱼类苗种是否携带IHNV,降低疫病传播风险,实现水产健康养殖管理。基于IHNV基因组序列保守性分析结果,以保守性最高的基质蛋白编码基因(matrix,M)为检测靶序列,设计了6条IHNV特异性扩增引物,对样品RNA进行逆转录等温链置换扩增。在部分引物5’端标记二茂铁分子,使扩增产物带有电化学信号,在部分底物中标记生物素分子,使扩增产物被亲和素修饰的电极表面捕获锚定,基于该原理构建了电化学生物传感体系,通过检测扩增产物的循环伏安信号,判断样品中是否携带IHNV。本方法能够在15 min内完成核酸扩增,且扩增反应在59~65℃的宽松温度区间内均可进行,无需精准控温,对设备和操作要求较低。在扩增温度63℃、信噪比为3的条件下,本方法最低检测限(limit of detection,LoD)为6.2 copies/μL,能够对未表现出感染症状的鲑鳟类鱼苗、鱼卵进行IHNV检测,适用于苗种场、养殖场等生产经营性场所的现场检测,在水产苗种鉴定领域具有良好的应用前景。
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