| 番木瓜胚性细胞悬浮系高效遗传转化体系的建立 |
| |
| 引用本文： | 杨敏,周陈平,李庆萌,邝瑞彬,吴夏明,魏岳荣.番木瓜胚性细胞悬浮系高效遗传转化体系的建立[J].果树学报,2023(10):2089-2097. |
| |
| 作者姓名： | 杨敏 周陈平 李庆萌 邝瑞彬 吴夏明 魏岳荣 |
| |
| 作者单位： | 广东省农业科学院果树研究所·农业农村部南亚热带果树生物学与遗传资源利用重点实验室·广东省热带亚热带果树研究重点实验室 |
| |
| 基金项目： | 广东省基础与应用基础研究基金项目（2022A1515010697,2021A1515010739）；;国家自然科学基金项目（32102355）； |
| |
| 摘 要： | 【目的】建立番木瓜高效遗传转化体系，为番木瓜基因功能研究和重要农艺性状改良提供新的技术支撑。【方法】以紫晖番木瓜胚性细胞悬浮系（embryogenic cell suspensions,ECS）为遗传转化受体，利用植物表达载体pCAMBIA1301和农杆菌介导法进行遗传转化，对抗生素浓度筛选、侵染时间、继代培养、抗性胚的诱导与萌发以及植株再生整个过程进行探索，最后获得抗性再生植株。【结果】通过设置不同浓度的头孢霉素和潮霉素处理，观察ECS细胞状态，筛选、确定头孢霉素和潮霉素最适处理质量浓度分别为200 mg·L-1和5 mg·L-1。工程菌和ECS共培养侵染2 d后转到含有头孢霉素和潮霉素的液体筛选培养基上进行继代培养，继代周期为14 d。经GUS染色验证，表明继代3次后的ECS几乎全部为转化细胞。将以上ECS转移到液体胚诱导培养基中进行培养，2个月后可获得大量球形体细胞胚，且GUS组织染色为蓝色。将球形体细胞胚转到半固体成熟培养基上培养，2个月后可获得成熟子叶期体细胞胚。子叶期体细胞胚在萌发培养基上光培养30 d后，可获得再生芽。任意选取再生芽进行GUS染色，均可染成蓝色。抗性再生芽...
|
| 关 键 词： | 番木瓜 胚性悬浮系 根癌农杆菌 遗传转化 共培养 |
|
|
