| 水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用 |
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| 引用本文： | 闫曼平,商金源,叶京飞,罗国良,王振军,易立,冯二凯,王春霞,赵宗正,陈明军,魏先力,高华,单晓枫,程悦宁.水貂犬瘟热病毒微滴数字PCR检测方法的建立与应用[J].中国兽医学报,2023(12):2445-2450. |
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| 作者姓名： | 闫曼平 商金源 叶京飞 罗国良 王振军 易立 冯二凯 王春霞 赵宗正 陈明军 魏先力 高华 单晓枫 程悦宁 |
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| 作者单位： | 1. 中国农业科学院特产研究所农业农村部经济动物疫病重点实验室;2. 吉林农业大学动物科学技术学院;3. 军事科学院军事兽医研究所;4. 吉林省榆树市秀水镇畜牧站;5. 通辽市科尔沁区动物疫病预防控制中心 |
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| 基金项目： | 中国农业科学院科技创新工程资助项目(CAAS-ASTIP-2021-ISAPS)；;吉林省科技发展计划资助项目(20220508044RC)； |
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| 摘 要： | 为建立检测水貂犬瘟热病毒(mink canine distemper virus, CDV)的微滴数字PCR(droplet digital PCR,ddPCR)定量方法，以便提供水貂CDV在诊断检测方面的技术支持，本研究根据实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)检测方法原理，建立了水貂CDV数字PCR方法，并优化了反应条件，评估了特异性、敏感性以及重复性。结果表明：ddPCR方法检测CDV的最适引物浓度为900 nmol/L,探针浓度为250 nmol/L,退火温度为55℃,升降温度为2.5℃/s,最低检测下限为4.4拷贝/μL;除CDV特异性扩增，其他常见病毒特异性检测结果均为阴性；重复性试验的变异系数均小于5%。采用该微滴数字PCR和荧光定量RT-PCR方法对30份犬、貂、狐、貉等组织(其中CDV阳性样品7份)样品进行检测，检测结果与临床检测结果相符。本研究建立的微滴数字PCR方法对CDV定量检测特异性强、灵敏度高，重复性好，可以用于水貂CDV临床样品的核酸检测，对水貂CDV发病早期的诊断提供新的定量检测方法。
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| 关 键 词： | 水貂犬瘟热病毒 微滴数字PCR N基因 |
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