| 铁皮石斛DoAGL6基因及启动子克隆与分析 |
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| 引用本文： | 孙博,王义琴,何玲,王冬梅,黄鑫,师凯辉,陈宇,臧睿,和凤美.铁皮石斛DoAGL6基因及启动子克隆与分析[J].热带作物学报,2022,43(9):1771-1778. |
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| 作者姓名： | 孙博 王义琴 何玲 王冬梅 黄鑫 师凯辉 陈宇 臧睿 和凤美 |
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| 作者单位： | 云南农业大学园林园艺学院,云南昆明 650201 |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金项目(31760591);晋宁区花卉产业科技特派团(202204BI090022) |
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| 摘 要： | AGL6基因是MADS-box转录因子家族中的一员,是植物特有的转录调控因子,参与花器官形成,对唇瓣的形成起到关键作用。获得铁皮石斛DoAGL6基因及其启动子,并进行生物信息学分析,对DoAGL6基因启动子进行瞬时表达活性验证,可为进一步研究DoAGL6基因的功能提供参考。本研究克隆DoAGL6基因及其上游的启动子序列,利用在线软件对克隆得到的目的基因序列、启动子序列进行预测,分别构建由全长启动子和5'端缺失启动子驱动GUS的重组表达载体并瞬时转化拟南芥及铁皮石斛原球茎,探究其表达活性。结果表明,成功克隆了DoAGL6基因及其启动子,DoAGL6基因编码区长729 bp,编码243个氨基酸,编码蛋白分子式为C1213H1955N359O375S12,预测亚细胞定位于细胞核中;保守结构域分析表明,DoAGL6具有保守的MADS-box和K-box两个结构域,属于MADS基因家族MIKC亚家族。启动子序列长度为1891 bp,顺式作用元件分析结果显示,DoAGL6基因启动子中除了核心启动元件TATA-box、CAAT-box外,还有许多其他顺式作用元件,如脱落酸响应元件（ABRE）、光反应顺式调节元件（G-Box）、茉莉酸甲酯响应元件（TGACG-motif）、MADS-box蛋白结合位点（GArG-Box）等。成功构建融合表达载体pCAMBIA1300-A1-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A2-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A3-promoter::GUS,拟南芥和铁皮石斛原球茎瞬时转化及GUS组织化学染色结果表明,随着启动子5'端缺失片段的增长,GUS活性逐渐降低,启动子活性逐渐减弱,即全长启动子A1（-1891~1）的活性最强,5'端缺失片段A2（-1488~1）次之,A3（-784~1）活性最弱。瞬时转化后的拟南芥和铁皮石斛原球茎GUS染色均呈现蓝色,但与对照相比均较浅,说明全长启动子和2个5'端缺失启动子都具有驱动GUS的活性,但启动活性都比CaMV35S启动子的启动活性弱。
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| 关 键 词： | 铁皮石斛 AGL6基因 基因克隆 启动子 GUS活性 |
| 收稿时间： | 2022-03-01 |
Cloning and Analysis of DoAGL6 Gene and Promoter from Dendrobium officinale |
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| SUN Bo,WANG Yiqin,HE Ling,WANG Dongmei,HUANG Xin,SHI Kaihui,CHEN Yu,ZANG Rui,HE Fengmei.Cloning and Analysis of DoAGL6 Gene and Promoter from Dendrobium officinale[J].Chinese Journal of Tropical Crops,2022,43(9):1771-1778. |
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| Authors: | SUN Bo WANG Yiqin HE Ling WANG Dongmei HUANG Xin SHI Kaihui CHEN Yu ZANG Rui HE Fengmei |
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| Institution: | College of Horticulture and Landscape, Yunnan Agricultural University, Kunming, Yunnan 650201, China |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | Dendrobium officinale AGL6 gene gene cloning promoter GUS activity |
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