| 含铁蛋白FAO1融合基因的衣藻核转化表达和分析 |
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| 引用本文： | 李明泽,程奇.含铁蛋白FAO1融合基因的衣藻核转化表达和分析[J].中国农业科学,2013,46(21):4515-4522. |
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| 作者姓名： | 李明泽 程奇 |
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| 基金项目： | 国家科技部“973”项目（2010CB126500）、国家自然科学基金（NSFC31070720） |
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| 摘 要： | 【目的】fao1编码Candida cloacae中一种含铁辅基的长链脂肪醇氧化酶。通过构建该基因的衣藻核转化表达载体进行转化，根据表达蛋白的生物活性判断fao1能否充分利用衣藻叶绿体中的铁元素行使功能；同时也为需铁固氮酶基因的研究提供方向。【方法】通过PCR把PsaD信号肽、fao1、His-tag标签融合，连接到pDBle载体上；采用玻璃珠转化法，将重组子导入莱茵衣藻（CW15）中；经博来霉素筛选后，获得转基因植株。运用PCR和RT-PCR法检测了转化衣藻，并且用亲和层析柱纯化蛋白，同时进行FAO1活性检测。【结果】重组质粒测序完全正确；PCR和RT-PCR检测转化衣藻基因组DNA和RNA，扩增片段与预期相符；转化衣藻FAO1蛋白纯化洗脱液使ABTS（2,2′-联氨-双（3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸）二胺盐）底物反应变色。【结论】成功构建了信号肽、FAO1和His-tag融合基因的衣藻核转化表达载体，重组质粒已整合到莱茵衣藻基因组中，并成功转录，纯化的蛋白检测有活性。
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| 关 键 词： | 长链脂肪醇氧化酶 信号肽 His-tag标签 衣藻核转化 RT-PCR |
| 收稿时间： | 2013-04-19 |
Expression and Analysis of Candida cloacae Long-Chain Fatty Alcohol Oxidase FAO1 by Nuclear Expression Vector in Chlamydomonas reinhardtii |
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| LI Ming-Ze,CHENG Qi.Expression and Analysis of Candida cloacae Long-Chain Fatty Alcohol Oxidase FAO1 by Nuclear Expression Vector in Chlamydomonas reinhardtii[J].Scientia Agricultura Sinica,2013,46(21):4515-4522. |
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| Authors: | LI Ming-Ze CHENG Qi |
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| Institution: | Biotechnology Research Institute, Chinese Academy of Agricultural Sciences, Beijing 100081 |
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| Abstract: | |
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| Keywords: | long-chain fatty alcohol oxidase transit peptide His-tag Chlamydomonas nuclear transformation RT-PCR |
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