| 摘 要： | 以花椒试管苗叶片、愈伤组织和悬浮细胞为试验材料,通过单因素试验研究酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离的影响,并以花椒试管苗叶片分离出的原生质体为试验材料,研究培养基种类、培养密度、不同激素配比对花椒原生质体培养的影响。结果表明,酶液浓度、渗透压调节剂浓度对花椒原生质体分离有显著影响。在适宜条件下,用甘露醇作花椒原生质体分离的渗透压调节剂,浓度在0.6～0.7mol·L~(-1)时分离效果最佳。以花椒叶片为原生质体分离材料的最佳酶液组成为CPW-0.7mol·L~(-1)甘露醇+1.0%(w/v)纤维素酶R-10+1.5%(w/v)果胶酶,酶解时间为10h,纯化后的原生质体产量和活力分别可达82.36×105个·g~(-1)和72.74%。以愈伤组织和悬浮细胞为分离材料的最佳酶液组成均为CPW-0.6mol·L~(-1)甘露醇+2.0%(w/v)纤维素酶R-10+0.5%(w/v)果胶酶,酶解12～14h,纯化后的原生质体产量及活力分别为31.26×105个·g~(-1)、59.15%和53.87×105个·g~(-1)、63.92%。以花椒试管苗叶片为原生质体分离材料,分离纯化后的花椒原生质体在无激素的WPM培养基中,培养密度为1×105个·mL~(-1),培养第3天原生质体第1次分裂,2周分裂3～5次,原生质体28d后形成微细胞团,培养60d后可形成2mm左右的愈伤组织。
|
