| Omp25蛋白的真核表达及其对巨噬细胞的作用 |
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| 引用本文： | 吕亚辉,邵萌,杜谦,陈恒,黄勇,童德文.Omp25蛋白的真核表达及其对巨噬细胞的作用[J].中国兽医学报,2014(1):70-74. |
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| 作者姓名： | 吕亚辉 邵萌 杜谦 陈恒 黄勇 童德文 |
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| 作者单位： | ;1.西北农林科技大学动物医学院 |
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| 摘 要： | 本试验旨在构建表达猪布鲁菌(Brucella suis)外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,并探讨Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞生长活性及细胞因子分泌的影响。以猪布鲁菌基因组DNA为模板,设计带有6×His标签的引物克隆Omp25基因,扩增产物克隆入pCI-neo真核表达载体,双酶切及测序鉴定正确后转染猪肺泡巨噬细胞3D4/21,检测其对巨噬细胞生长活性和分泌细胞因子的影响。RT-PCR和Western blotting检测结果证实Omp25蛋白获得正确表达。显微镜观察细胞形态表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的形态无明显影响。MTT结果表明,Omp25蛋白对猪肺泡巨噬细胞的生长活性有轻度但不显著的抑制作用。ELISA检测TNF-α和IL-12蛋白表达水平表明,Omp25蛋白可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。本试验成功构建了表达猪布鲁菌外膜蛋白Omp25蛋白的真核重组表达质粒,该蛋白对猪肺泡巨噬细胞的细胞形态没有明显影响,对其生长活性有轻度但不显著的抑制作用,可以显著抑制巨噬细胞分泌TNF-α和IL-12。
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| 关 键 词： | 猪布鲁菌 Omp25蛋白 猪巨噬细胞 真核表达 |
Construction of Omp25 eukaryotic expression vector and analysis of its effects on porcine macrophage |
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