| 甘蓝型油菜BnClo1基因克隆、表达载体的构建及原核表达 |
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| 引用本文： | 丁勇,常玮,刘小烛.甘蓝型油菜BnClo1基因克隆、表达载体的构建及原核表达[J].中国农业科学,2010,43(2):252-258. |
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| 作者姓名： | 丁勇 常玮 刘小烛 |
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| 作者单位： | （西南林学院资源学院）; |
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| 基金项目： | 国家自然科学基金，西南地区生物多样性保护国家林业局重点实验室开放基金，西南林学院森林培育云南省重点学科 |
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| 摘 要： | 【目的】克隆甘蓝型油菜(Brassica napus)油体钙蛋白(caleosin)基因BnClo1,并进行原核表达研究。【方法】在获得甘蓝型油菜BnClo1基因全长cDNA的基础上,根据BnClo1基因编码区设计1对特异引物,以甘蓝型油菜种子总RNA为模板,通过RT-PCR获得了约750bp的cDNA片段,T/A克隆后进行序列测定。随后将该蛋白成熟肽cDNA片段克隆到原核表达载体pTYB12中,构建融合表达载体pTYB12-BnClo1,转化到Escherichia coli ER2566(DE3)中进行表达。【结果】测序结果显示,RT-PCR获得的cDNA全长768bp,包含完整的开放阅读框738bp,编码245个氨基酸残基,caleosin分子量为28.1kD。原核表达产物经SDS-PAGE分析表明,以20℃、4mmol·L-1IPTG诱导该基因表达效果最好,诱导产物为一个与理论值相符的83.1kD的融合蛋白intein-caleosin。【结论】克隆了油菜BnClo1基因,并在大肠杆菌中进行了优化表达。为进一步纯化和鉴定目的蛋白,及研究其功能奠定了试验基础。
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| 关 键 词： | 甘蓝型油菜 油体钙蛋白 BnClo1基因 原核表达 pTYB12 |
| 收稿时间： | 2009-05-15; |
Molecular Cloning, Expression Vector Construction and Prokaryotic Expression of BnClo1 Gene from Brassica napus |
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| DING Yong,CHANG Wei,LIU Xiao-zhu.Molecular Cloning, Expression Vector Construction and Prokaryotic Expression of BnClo1 Gene from Brassica napus[J].Scientia Agricultura Sinica,2010,43(2):252-258. |
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| Authors: | DING Yong CHANG Wei LIU Xiao-zhu |
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| Institution: | (School of Natural Resources, Southwest Forestry University)
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| Abstract: | |
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| Keywords: | pTYB12 rape (Brassica napus) caleosin BnClo1 gene prokaryotic expression pTYB12 |
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